ما هي أنواع ألوان فلورسنت فلوجو الملونة؟

من أجل تطوير قياس التدفق، تكون قوة النبض أكثر أهمية من مضادات الأكسدة، التي تتبع ألوان الفلورسنت التي تتزامن مع قدرات اكتشاف الأداة. لا تتوافق صبغات الفلورسنت مع تدفق قنوات الكشف عن الأدوات.

يمكن تقسيم صبغات الفلورسنت ذات التدفق المستمر إلى 11 فئة:

1. الجزيئات العضوية الصغيرة

عندما يتم عمل جزيئات عضوية صغيرة، يجب أن يكون معظم الناس مختلطين، ولكن إذا كان لديهم بعض الأمثلة، فسيتعين عليهم بالتأكيد أن يعرفوا ذلك.

FITC (389 دالتون)، Alexa Fluor 488 (تناظري FITC، 643 دالتون)، Texas Red (TxRed، 625 دالتون)، Alexa Fluor 647 (1155 دالتون)، أزرق المحيط الهادئ (242 دالتون) وCy5 (242 دالتون) 762 دالتون). ¿هل يتم استخدامه بشكل أساسي؟

تحتوي هذه الجزيئات العضوية الصغيرة على طيف انبعاث ثابت وقليل من الانتشار من ستوكس (يختلف بين خطوط طول خط الإثارة والانبعاث، حوالي 50-100 نانومتر)، وهي عبارة عن جزيئات صورية ويتم ربطها بسهولة بمضادات الأكسدة، من خلال ما الذي يجب استخدامه على نطاق واسع.

يرجى الإشارة إلى أن ألوان Alexa Fluor هي أكثر الصور التي يوفرها FITC، إذا كنت ترغب في الحصول على صورة، فهذا هو الخيار.

2. فيكوبيليبروتينا

البروتينات الليفية هي جزيئات بروتين كبيرة الحجم مستخرجة من الطحالب مثل البكتيريا الزرقاء والدينوفلاجيلادوس، على سبيل المثال، تحتوي البروتينات الليفية (PE) على جزيء يبلغ 240.000 دالتون. تحتوي هذه البروتينات على نطاقات كبيرة من ستوكس (75-200 نانومتر) ومستقرات الانبعاث. نظرًا لأن البروتينات الليفية كبيرة، فإنها تحتوي عادةً على نسبة من البروتين المفلور بنسبة 1:1 أثناء الاقتران، مما يجعلها مفيدة لقياس التدفق الكمي.

ومع ذلك، فإن البروتينات الليفية تصبح عرضة للابيضاض الضوئي، لذلك لا نوصي بالتعرض المطول أو المتكرر لمصادر الإثارة.

في عائلة البروتينات الليفية، بالإضافة إلى البروتين الليفي (PE)، يوجد البروتين الليفي (APC) وبروتين الكلوروفيلا مومورديكا (PerCP).

3. بونتوس كوانتيكوس

النقاط الكمومية (Qdots) هي بلورات نانوية أشباه الموصلات مع أطياف انبعاث الفلورسنت والتي ترتبط ارتباطًا وثيقًا بحجم البلورات النانوية. إذا كانت مثيرة بشكل أفضل باستخدام الأشعة فوق البنفسجية أو البنفسجية، ولكن يتم أيضًا إثارةها بسهولة باستخدام أشعة ليزر أخرى بكميات كبيرة، حتى عندما تستخدم نقاط Q في تجارب متعددة المعلمات، فإن هذه الإثارة الصغيرة لخطوط الطول الأخرى من الليزر تعقد التعويض الفلورسنسيا.

كما هو الحال، على الرغم من أن صبغات النقاط الكمومية تحتوي على درجة عالية من التألق، فإن هذه التفاعلات تستبدل بشكل أساسي الصبغات البوليمرية في نماذج متعددة المعلمات بسبب صعوبة مشاكل التعويض هذه وصعوبة استخدام نقاط واحدة في مكافحة الإرهاق.

4. صبغات بوليميروس

تتكون الصبغات من الجزيئات الكبيرة (البوليمرات) من سلسلة من البوليمرات التي تستعيد إشارات الضوء ويمكنها 'ضبط' الامتصاص والانبعاث لخطوط الطول على طول سلسلة من الضوء المحدد، حسب طول سلسلة البوليمر والوحدات الجزيئية الفرعية الموجودة. unidas. تتميز هذه الألوان بأنها ثابتة للغاية ولها كفاءة كبيرة تشبه البروتينات الليفية مع استقرار الصورة بشكل أفضل.

حتى يمكن تصنيع الملونات البوليمرية لاستيعاب خطوط الطول فقط من خلال خطوط طول معينة، مما يؤدي إلى تجنب مشكلة إثارة Qdots مع خطوط طول تلك الرحلات.

ممثلو الصبغات البوليمرية النموذجية هم اللون البنفسجي اللامع (BV) والأشعة فوق البنفسجية اللامعة (BUV) والأزرق اللامع (BB).

5. الصبغات جنبًا إلى جنب

تحتوي الصبغات المتراكبة على بروتينات ليفية كيميائية (PE، APC، PerCP) أو صبغات من الجزيئات الكبيرة (BV421، BUV395) تحتوي على صبغات عضوية فلورية من الجزيئات الصغيرة (Cy3، Cy5، Cy7) وتستخدم نقل طاقة الفلورسنت (FRET) لتكوين مفرد واحد الليزر أكبر خطوط الطول من الضوء المنبعث هو مثير.

على سبيل المثال، يبلغ الحد الأقصى لإثارة Texas Red 589 نانومتر، بينما يبلغ انبعاث PE 585 نانومتر، حتى تتمكن من الحصول على PE مع Texas Red، فإن ضوء انبعاث PE يثير Texas Red عبر FRET، مما يجعل PE-TxRed متاحًا 488 نانومتر. o الإثارة بالليزر 532 نانومتر.

يمكن أيضًا استخدام نفس الطريقة أيضًا لمضادات الأكسدة البوليمرية جنبًا إلى جنب مع صبغات الجزيئات العضوية الصغيرة.

تتميز الصبغات المتزامنة بأنها شديدة اللمعان وتحتوي على قيم كبيرة لتوزيع ستوكس (150-300 نانومتر)، وهي مفيدة لاكتشاف مستضدات أسفل الكثافة. ومع ذلك، فإن الملونات جنبًا إلى جنب هي أقل استقرارًا من أن الفلوروكرومات المتبرع بها وكفاءة نقل الطاقة تختلف كثيرًا عن غيرها، مما يعقد التعويض.

6. المعادن النادرة

أيونات المعادن الشائعة ليست فلورية بشكل حصري، ولكن يتم ذكرها أيضًا هنا.

لا ترتبط المواد المضادة للأكسدة المستخدمة في قياس الكتلة بالفلورسين، ولكنها مقترنة بأيونات المعادن الشائعة من نظير واحد فقط في سلسلة من اللانتانيدوس. يوجد حاليًا 35 نظيرًا من النظيرات المتاحة تجاريًا لاقتران مكافحة الإرهاب. هذه المسبار لا تحتوي على مصابيح فلورية وهي وحدها مناسبة لقياس الحجم.

7. بروتين الفلورسنت

تستخدم البروتينات الفلورية مع التردد كأنظمة معلومات للتعبير العام. الأكثر استخدامًا هو البروتين الأخضر الفلوري (GFP) من Aequorea victoria. هذا مشتق من CFP و YFP.

يشتق بروتين الفلورسنت الأحمر (DsRed) من أنيمونا دي مار ديسكوزوما، والجيل التالي من البروتينات الفلورية الأحادية (mCherry، mBanana) مشتق من DsRed ويمتلك أطياف انبعاث وإثارة أكبر.

بفضل تقنية استنساخ الجينات، يوجد مئات السنين من بروتينات الفلورسنت، وأطياف الإثارة والانبعاث من الأشعة فوق البنفسجية حتى نفاذ الأشعة تحت الحمراء.

8. صبغات الحمض النووي

يتم توصيل صبغات الحمض النووي إلى ADN أو ARN أو من خلاله. يمكن استخدامه لقياس ADN لتحليل الخلية الخلوية (ص. على سبيل المثال، PI، 7-AAD، DyeCycle Violet، DAPI)، تصنيف الكروموسومات (ص. على سبيل المثال، Hoescht 33342، Chromomycin A3)، تصنيف الخلايا الرئيسية عبر تحليل التكاثر الجانبي (ص. على سبيل المثال، Hoescht 33342)، تعيش الخلايا الميتة وتختلف وتصنف البكتيريا.

يمكن تحديد مستوى التكاثر من خلال مزيج ملونات الحمض النووي مع غيرها من الماركات، مثل مضاد البروموكسيوريدينا المقترن مع ملون الفلورسنت (BrdU).

9. تكاثر الصبغات الخلوية

يحتضن التكاثر الخلوي الخلايا مع BrdU (بروموديوكسيوريدينا)، والتي تدمج مع خلاصة ADN الخلوية، كما أنها تحتوي على مضادات وألوان ADN الموجهة ضد BrdU. ومع ذلك، فإن هذه الطريقة ليست مناسبة لدراسات الانتشار لفترة طويلة.

يمكن استخدام المادة الفعالة كربوكسي فلوري (CFSE) لتقطيع عدة أقسام من الخلايا في الانتشار. تتوفر أيضًا الآن ألوان مختلفة وألوان مختلفة من CFSE. بالتركيز المناسب، لا تؤثر هذه الصبغات على النمو أو الشكل الخلوي، مما يجعلها مناسبة لدراسات الانتشار لفترة طويلة.

10. صبغة الموت الخلوية

يمكن أن تحدد القدرة الحيوية الخلوية بين الألوان المستبعدة (على سبيل المثال، تعزيز الخاصية، DAPI) أو من خلال اتحاد الألوان مع الأمينات داخل الخلايا.

لا يمكن ظهور صبغات الاستبعاد وهي مناسبة فقط للخلايا بحيث لا تكون مصابة وتتطلب تحليلًا مباشرًا.

الألوان الأمينية، بما في ذلك Live/Dead (ThermoFisher)، وZombie (Biolegend)، أو Fixable Viability (BD Biosciences)، هي مناسبة للخلايا الجذعية، وعلى هذا النحو، مع الخلايا المعدية، والخلايا الصغيرة ذات المستضدات داخل الخلايا، والخلايا الجذعية مع بارافورمالدهيد.

11. مؤشر لون كالتشيو

تقوم مؤشرات الرسم البياني بالتجربة على تغيير اللون من خلال استخدام الكلس ويمكن استخدامها للإشارة إلى التنشيط والتنشيط الخلوي.

يتم استخدام اللون بشكل أكبر عندما يكون هناك جهاز Indo-1، وهو مسبار كالتشيو ثنائي الأشعة فوق البنفسجية. يوجد أيضًا مسبار كالتشيو أزرق أخضر لـ Fluo-3.