Dilihat: 30 Penulis: Editor Situs Waktu Publikasi: 10-05-2022 Asal: Lokasi
Untuk mendeteksi sitometri flujo, impulsor fuerza lebih penting daripada anticuerpos, berikut adalah warna-warna neon yang bertepatan dengan kemampuan deteksi instrumen. Warna-warna tersebut berpendar tanpa henti pada saluran deteksi instrumen.
Warna lampu neon yang terus ada dapat dibagi menjadi 11 kategori berikut:
1. Molekul organik kecil
Jika ada molekul organik kecil yang sebagian besar orang harus bingung, tetapi jika ada beberapa contoh, saya pasti akan melakukannya.
FITC (389 Da), Alexa Fluor 488 (análogo FITC, 643 Da), Texas Red (TxRed, 625 Da), Alexa Fluor 647 (1155 Da), Pacific Blue (242 Da) dan Cy5 (242 Da) 762 Da) . Apakah itu dasar penggunaan?
Molekul organik kecil ini memiliki spektrum emisi yang konstan dan sedikit di atas permukaan Stokes (perbedaan antara garis bujur dari titik eksitasi dan emisi, kira-kira 50-100 nm), sehingga foto yang dihasilkan dan digabungkan dengan mudah dengan anti-kubah, sehingga dapat digunakan tambahan.
Mungkin ada pena yang menyebutkan bahwa warna Alexa Fluor adalah foto yang paling stabil daripada FITC, karena jika Anda ingin mendapatkan gambar, maka itu adalah pilihan.
2. Ficobiliproteina
Ficobiliproteínas adalah molekul protein dari organisme besar yang diekstraksi dari algas seperti cyanobacteria dan dinoflagelados, misalnya, ficoeritrina (PE) mempunyai berat molekul sebesar 240.000 Da. Perlindungan ini sangat besar pada jaringan Stokes (75-200 nm) dan spektrum emisi yang stabil. Karena protein-protein tersebut sangat besar, biasanya memiliki proporsi protein dengan fluorcromo 1:1 selama konjugasi, yang mana ubin tersebut berguna untuk sitometri flugo cuantitativa.
Namun, protein ficobili rentan terhadap cahaya, oleh karena itu Anda tidak merekomendasikan paparan yang berkepanjangan atau berulang-ulang pada sumber rangsangan.
Dalam keluarga ficobiliproteínas, además de la ficoeritrina (PE), ada la aloficocianina (APC) dan la proteína de clorofila Momordica (PerCP).
3. Poin-poin penting
Poin-poin ilmiah (Qdots) adalah semikonduktor kristal nano dengan spektrum emisi fluoresensi yang sangat terkait dengan kristal nano tersebut. Jika lebih menggairahkan dengan sinar ultraviolet atau violet, tetapi juga mudah untuk menggairahkan dengan laser lain dalam rentang kecil, karena ketika menggunakan Qdots dalam eksperimen multiparametrik, rangsangan ini tidak terlalu mengganggu garis bujur lain dari laser yang memperumit kompensasi fluoresensi.
Biasanya, meskipun warna titik-titik tersebut sangat cemerlang, reaksi ini terutama diterapkan pada warna-warna polimetrik seperti multiparametrik yang disebabkan oleh kesulitan masalah kompensasi dan kesulitan Qdots dan anti-cuerpos.
4. Warna-warna cerah
Warna makromolekul (polimer) terdiri dari rangkaian polimer yang menunjukkan titik-titik cahaya dan dapat 'mensintonisasi' absorsi dan emisi garis bujur pada titik-titik cahaya tertentu, yaitu garis bujur dari rentang polimer dan subunidades molekuler yang merupakan satu kesatuan. Warna-warna ini sangat stabil dan memiliki efisiensi yang sama dengan ficobiliproteínas dengan kestabilan foto yang sangat baik.
Karena warna polimetrik dapat dibuat untuk menyerap hanya garis bujur dari permukaan tanah tertentu, maka masalah eksitasi Qdots dengan garis bujur dari titik terang dapat dihindari.
Perwakilan dari jenis warna polimer adalah el violeta brillante (BV), el ultravioleta brillante (BUV) dan el azul brillante (BB).
5. Berwarna secara bersamaan
Warna-warna tersebut secara bersamaan mencakup ficobiliproteínas (PE, APC, PerCP) dan makromolekul warna (BV421, BUV395) yang mengandung zat-zat organik yang berfluoresensi dari molekul kecil (Cy3, Cy5, Cy7) dan menggunakan transfer energi fluorescencia (FRET) untuk menghasilkan laser tunggal lebih banyak garis bujur dari titik di mana cahaya itu keluar sangat menarik.
Misalnya, eksitasi maksimum Texas Red adalah 589 nm, sementara emisi PE adalah 585 nm, karena PE diterima dengan Texas Red, emisi PE eksitasi Texas Red melintasi FRET, jadi PE-TxRed tersedia pada 488 nm. o laser eksitasi pada 532 nm.
Metode yang sama juga dapat digunakan untuk bahan anti-polimerik dengan warna molekul-molekul kecil organik.
Warna-warna tersebut keduanya sangat cemerlang dan memiliki nilai luar biasa dari jaringan Stokes (150-300 nm), yang berguna untuk mendeteksi antigen baja padat. Namun, warna-warna tersebut sama-sama lebih rendah daripada yang ditentukan oleh fluorcromos dan efisiensi transfer energi yang bervariasi dari yang lain, yang mempersulit kompensasi.
6. Ion logam pesados
Ion-ion dari logam-logam tersebut tidak terlalu berfluoresensi, namun juga disebutkan di atas.
Anticuerpos yang digunakan dalam sitometri masa tidak digabungkan dengan fluoresens, karena jika digabungkan dengan ion logam hanya dalam satu isotop dalam rangkaian Lantanido. Saat ini terdapat 35 isotop Lantánidos yang tersedia secara komersial untuk konjugasi anticuerpos. Ini tidak berpendar dan hanya cukup untuk sitometri masa.
7. Protein berpendar
Protein yang berpendar digunakan dengan frekuensi yang sama seperti sistem informasi untuk ekspresi genetik. Yang paling banyak digunakan adalah proteína verde fluorescente (GFP) dari Aequorea victoria. Ini adalah turunan dari CFP dan YFP.
Protein fluorescente roja (DsRed) berasal dari anémona de mar del hongo Discosoma, dan generasi terdekat dari protein fluorescentes monoméricas (mCherry, mBanana) adalah turunan dari DsRed dan memiliki spektrum emisi dan eksitasi yang lebih besar.
Dengan teknologi kloning gen yang canggih, terdapat protein-protein berpendar kuno yang memiliki spektrum eksitasi dan emisi dari sinar ultraviolet hingga inframerah.
8. Warna asam nukleat
Warna asam inti tidak termasuk dalam ADN, atau ARN juga. Jika Anda dapat menggunakan untuk menghitung ADN untuk menganalisis ciclo celular (p.ej., PI, 7-AAD, DyeCycle Violet, DAPI), mengklasifikasikan cromosomas (p.ej., Hoescht 33342, Chromomycin A3), mengklasifikasikan sel-sel mediante analisis población lateral (p.ej., Hoescht 33342), Hidup dan sel yang berbeda dan bakteri yang klasik.
Tingkat proliferasinya dapat ditentukan di tengah-tengah kombinasi pewarna asam inti dengan merek lain, seperti anti-bromodesoxiuridina yang terkonjugasi dengan pewarna fluorescent (BrdU).
9. Tintes de proliferasi seluler
Perkembangbiakan sel terjadi di tengah masa inkubasi sel dengan BrdU (bromodesoxiuridina), yang digabungkan dengan sintesis ADN selular dan kemudian menjadi anti-cuerpos dan warna sel ADN melawan BrdU. Namun demikian, metode ini tidak cukup untuk studi proliferasi di tempat yang luas.
Succinimidil ester de carboxifluoresceín (CFSE) dapat digunakan untuk menghilangkan beberapa divisi sel dalam proliferasi. Varian warna cerah dan warna CFSE juga tersedia saat ini. Dalam konsentrasi yang sesuai, warna ini tidak mempengaruhi peningkatan atau morfologi sel, yang telah memadai untuk studi pertumbuhan di tempat yang luas.
10. Warna seluler
Ponsel dapat digunakan untuk menentukan median warna yang dikecualikan (p.ej., yoduro de propidio, DAPI) atau median penyatuan warna dalam amina intraseluler.
Warna-warna pengecualian tersebut tidak dapat dideteksi dan hanya dapat dilakukan oleh orang-orang yang tidak terinfeksi dan memerlukan analisis segera.
Warna-warna tersebut, termasuk Hidup/Mati (ThermoFisher), Zombie (Biolegend) atau Kelangsungan Hidup yang Dapat Diperbaiki (BD Biosciences), adalah adecuados untuk sel-sel tubuh dan, oleh karena itu, sel-sel yang terinfeksi, sel-sel yang terkena antigen intraseluler, sel-sel mati dengan paraformaldehid.
11. Indikator warna calcio
Warna-warna tersebut menunjukkan percobaan warna pada permukaan warna dan dapat digunakan untuk menunjukkan aktivasi dan señalización seluler.
Pewarna yang paling sering digunakan adalah ketika Anda berada di Indo-1, yang merupakan lapisan luar UV. Juga ada suara calcio azul-verde untuk fluo-3.