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بازدید: 27 نویسنده: ویرایشگر سایت زمان انتشار: 2022-05-10 منبع: سایت
Para el desarrollo de la citometría de flujo، la fuerza impulsora más importante son los anticuerpos، seguidos de los colorantes fluorescentes que coinciden con las capacidades detección del instrumento. Los tintes fluorescentes aún no siguen el ritmo de la cantidad de canales detección de instrumentos.
Los tintes fluorescentes de flujo continuo existentes se pueden dividir en las siguientes 11 دسته:
1. Moléculas orgánicas pequeñas
Cuando se trata de moléculas orgánicas pequeñas, la mayoría de la gente debe estar confundida, pero si doy algunos ejemplos, definitivamente me daré cuenta.
FITC (389 دا)، الکسا فلور 488 (آنالوگ FITC، 643 دا)، تگزاس قرمز (TxRed، 625 دا)، الکسا فلور 647 (1155 دا)، آبی اقیانوس آرام (242 دا) و Cy5 (242 دا) 762 دا). آیا اساساً آمریکا هستید؟
Estas pequeñas moléculas orgánicas tienen un espectro de emisión konstante y un pequeño desplazamiento de Stokes (تفاوت ورودی طولهای جغرافیایی از onda de excitación y emisión، aproximadamente 50-100 nm conjuest nm)، anticuerpos, por lo que se utilizan ampliamente.
Vale la pena mencionar que los tintes Alexa Fluor son más fotoestables que FITC, por lo que si desea obtener una imagen, son la opción.
2. Ficobiliproteína
Las ficobiliproteínas son moléculas de proteína de gran tamaño extraídas de algas como cianobacterias y dinoflagelados, por ejemplo, la ficoeritrina (PE) tiene un peso molecular de 240,000 Da. پروتئینهای بزرگ دسپلازامینتوس استوکس (75-200 نانومتر) و طیف گستردهای از انتشار. Debido a que las ficobiliproteínas son grandes, normalmente tienen una proporción de proteína a fluorocromo de 1:1 durante la conjugación, lo que las hace útiles para la citometría de flujo cuantitativa.
تحریم گناه، las ficobiliproteínas son susceptibles al fotoblanqueo، به دلیل اینکه نمی تواند توضیحی را ارائه دهد، طولانی مدت یا تکرار یک fuentes de luz de excitación.
En la familia de las ficobiliproteínas، además de la ficoeritrina (PE)، وجود la aloficocianina (APC) و la proteína de clorofila Momordica (PerCP).
3. Puntos cuánticos
Los puntos cuánticos (Qdots) son nanocrystales semicondutes con espectros de emisión de fluorescencia que están estrechamente relacionados con el tamaño de los nanocrystales. Se excitan mejor con la luz ultravioleta o violeta, pero también se excitan facilmente con otros láseres en pequeñas cantidades, por lo que cuando se usan Qdots en experimentos multiparamétricos, esta pequeña excitación de otras de láseres de pequeñas cantidades فلورسنسیا
Como tal، aunque los tintes de puntos cuánticos tienen un alto brillo، estos reactivos se reemplazan principalmente por tintes poliméricos en esquemas multiparamétricos debido a la diificultad de estos problemas de compensación reactivos de compensación a anticuird.
4. Tintes de polímeros
Los tintes macromoleculares (polímeros) منسجم در cadenas de polímeros que recogen señales de luz y pueden 'sintonizar' la absorción y emisión de longitudes de onda de luz específicas, según la طولی مولکولی زیر مولکولی. استان یونیداس Estos tintes son muy estables y tienen eficiencias cuánticas مشابه یک las ficobiliproteínas con una fotoestabilidad muy mejorada.
Dado que los colorantes poliméricos pueden fabricarse para absorber solo longitudes de onda de luz específicas، se evita el problema de la excitación de Qdots con longitudes de onda cruzadas.
Los represantes típicos de los tintes poliméricos son el violeta brillante (BV)، el ultravioleta brillante (BUV) و el azul brillante (BB).
5. Tintes en Tándem
Los tintes en tendem acoplan químicamente ficobiliproteínas (PE, APC, PerCP) یا tintes macromoleculares (BV421, BUV395) contintes orgánicos fluorescentes de molécula pequeña (Cy3, Cy5, la fluorestransferent usage) (FRET) برای فرمار و لیزر انفرادی Más longitudes de onda de la luz emitida se excita.
برای نمونه، el máximo de excitación de Texas Red es de 589 nm، mientras que la emisión de PE es de 585 nm، برای لو que al acoplar PE con Texas Red، la luz de emisión de PE excita Texas Red a través de FRET. 488 نانومتر o لیزر تحریک کننده 532 نانومتر.
El mismo método también se puede utilizar para anticuerpos poliméricos junto contintes de moléculas pequeñas orgánicas.
Los tintes en tándem son muy brillantes y tienen grandes valores de desplazamiento de استوکس (150-300 نانومتر)، که پسرش برای آشکارساز ضد ژنوس دنسیداد. Sin embargo، los colorantes en tándem son menos estables que los fluorocromos donantes y la eficiencia de la transferencia de energía varía de un lote a otro، lo que complica la compensación.
6. Iones de metales pesados
Los iones de metales pesados no son estrictamente fluoresceína, pero también los mencionamos aquí.
Los anticuerpos utilizados en la citometría de masas no se conjugan con fluoresceína، sino que se conjugan conjugan iones de metales pesados de un solo isótopo en la serie de los lantánidos. Actualmente hay 35 isótopos de lantánidos disponibles Comercialmente for la conjugación de anticuerpos. Estas sondas no son fluorescentes y solo son adecuadas para citometría de masas.
7. پروتئین فلورسنت
پروتئینهای فلورسنت از سیستمهای اطلاعاتی برای بیان ژنی استفاده میکنند. La más utilizada es la proteína verde fluorescente (GFP) de Aequorea victoria. De esto se derivan CFP y YFP.
La proteína fluorescente roja (DsRed) se deriva de la anémona de mar del hongo Discosoma, y la próxima generación de proteínas fluorescentes monoméricas (mCherry, mBanana) se derivan de DsRed y tienen espectros de amiciós.
Con la madurez de la tecnología de clonación de genes، موجودات پروتئینی فلورسنت، طیف وسیعی از تحریکات و انتشارات ماوراء بنفش موجود در این زمینه.
8. Tintes de ácido nucleico
Los tintes de ácido nucleico se unen al ADN، al ARN oa ambos. Se pueden usar para cuantificar el ADN para el análisis del ciclo celular (p. ej., PI, 7-AAD, DyeCycle Violet, DAPI), cromosomas clasificar (p. ej., Hoescht 33342, Chromomycin A3) (p. ej., Hoescht 33342), Live y las células muertas se diferencian y lasbacterials se clasifican.
El nivel de proliferación se puede determinar mediante la combinación de colorantes de ácido nucleico con otro marcador, como un anti-bromodesoxiuridina conjugado con colorante fluorescente (BrdU).
9. Tintes de proliferación celular
La proliferación celular se mide incubando las células con BrdU (bromodesoxiuridina) , que se incorpora a la síntesis de ADN celular y luego se tiñe con anticuerpos y tintes de ADN dirigidos contra BrdU. تحریم گناه، این روش برای گسترش estudios de proliferación a large plazo.
El succinimidil éster de carboxifluoresceína (CFSE) برای تقسیمبندی چندگانه واقعی در سلولهای پرولیفراسیون استفاده میکند. Las variantes rojas y moradas de los tintes CFSE también están disponibles ahora. En concentraciones apropiadas, estos tintes no afectan el crecimiento o la morfología celular, lo que los hace adecuados para estudios de proliferación a large plazo.
10. Tinte de muerte celular
La viabilidad mobile se puede determinar mediante colorantes de exclusión (p. ej., yoduro de propidio, DAPI) یا mediante la unión de colorantes a aminas intracellulares.
Los tintes de exclusión no se pueden fijar y solo son adecuados para células que no son infecciosas y requieren un análisis inmediato.
Los tintes de amina، شامل Live/Dead (ThermoFisher)، Zombie (Biolegend) o Fixable Viablity (BD Biosciences)، son adecuados para células fijadas y، por lo tanto، con células infecciosas، concélulas infecciosas، concélulas células infecciosas, células células teñosciences fijadas con paraformaldehído.
11. Colorante indicador de calcio
Los tintes indicadores de calcio experimentan un cambio de color al unirse al calcio y pueden usarse para indicar la activación y señalización celular.
El colorante más Utilizado sigue siendo el indo-1، la sonda de calcio bifásico UV. También hay sondas de calcio azul-verde para fluo-3.
