Как получить флуоресцентные флуоресцентные краски?

Для цитометрии флюоресценции наиболее важным является пламенный импульс, связанный с антикуэрпосом, затем флуоресцентные цвета, которые совпадают с возможностями обнаружения инструмента. Флуоресцентные оттенки не слышны в ритме каналов обнаружения инструментов.

Флуоресцентные оттенки флуоресцентного света продолжают существовать, если их можно разделить на 11 категорий:

1. Органические молекулы пекеньяс

Когда я работаю с органическими молекулами, мэрия рода должна быть запутанной, но если многие из них действительно будут такими, я окончательно отдаю себе отчет.

FITC (389 Да), Alexa Fluor 488 (аналог FITC, 643 Да), Texas Red (TxRed, 625 Да), Alexa Fluor 647 (1155 Да), Pacific Blue (242 Да) и Cy5 (242 Да) 762 Да). ¿Es básicamente usado?

Estas pequeñas moléculas Organicas связаны с спектром постоянного излучения и частицами Стокса (разница между долготами волн возбуждения и излучения, приблизительно 50–100 нм), а также фотостудиями и простым соединением в прошлом, потому что он был использован усиленно.

Я хочу упомянуть, что оттенки Алексы Флуор и другие фотоматериалы FITC, чтобы они хотели получить изображение, это выбор.

2. Фикобилипротеин

Фикобилипротеины являются молекулами белка из больших водорослей, такими как цианобактерии и динофлагелады, например, фикоэритрин (PE) имеет молекулярную массу в песо 240 000 Да. Эти белки связаны с большими смещениями Стокса (75–200 нм) и установленными спектрами излучения. Если у вас большие фикобилипротеины, нормальная пропорция белка и флуорохром 1:1 во время конъюгации, то, что нужно для цитометрии количественного флюо.

Без эмбарго фикобилипротеины становятся восприимчивыми к фотографиям, поэтому мы не рекомендуем продлевать экспозицию или повторять источники возбуждения.

В семействе фикобилипротеинов есть любители фикоэритрина (PE), существуют алофикоцианины (APC) и протеины хлорофилы Momordica (PerCP).

3. Пунтос куантикос

Лос-точки (Qdots) представляют собой нанокристаллические полупроводники с спектрами флуоресцентного излучения, которые являются наиболее напряженными в отношениях с нанокристаллами. Если большее возбуждение происходит от ультрафиолетового излучения или фиолетового света, но также облегчается возбуждение от других лазеров в отдельных точках, если использовать Qdots в многопараметрических экспериментах, это может привести к возбуждению других долгот от лазеров, усложняющих компенсацию. де флуоресценция.

В результате, когда цветные точки были слишком яркими, эти реактивные реакции были заменены в основном полимерными оттенками и многопараметрическими конструкциями, вызванными трудностями в отношении компенсационных проблем и трудностями в работе с точками в прошлом.

4. Полимерные оттенки

Макромолекулярные оттенки (полимеры) состоят из каден полимеров, которые распознают участки света, и могут «синтонизировать» поглощение и излучение долгот определенных световых лучей, затем долготу кадены полимеров и молекулярные субъединицы, которые есть. унидас. Эти оттенки могут быть более эффективными и похожими на фикобилипротеины с лучшей фотостабилизацией.

Если полимерные красители можно изготовить для поглотителя отдельных долгот света, это может привести к возникновению проблемы с возбуждением Qdots с долготами креста.

Типичные представители полимерных оттенков: блестящая фиолетовая (BV), блестящая ультрафиолетовая (BUV) и блестящая голубая (BB).

5. Тандемные оттенки

Цвета в тандеме сочетаются с фикобилипротеинами (PE, APC, PerCP) или макромолекулами (BV421, BUV395) с органическими флуоресцентными молекулами (Cy3, Cy5, Cy7) и использованием переноса энергии флуоресценции (FRET) для формирования соло. Лазерная долгота света излучается и возбуждается.

Например, максимальное возбуждение Texas Red составляет 589 нм, хотя излучение PE составляет 585 нм, поэтому то, что соответствует PE-TxRed с Texas Red, свет излучения PE, возбуждающего Texas Red, проходит по FRET, и то, что PE-TxRed является доступным 488 нм. o лазер возбуждения 532 нм.

Этот метод также можно использовать для антикоагулянтных полимерных соединений с оттенками органических молекул.

Тени в тандеме - это самые блестящие и большие значения деплясмента Стокса (150-300 морских миль), которые можно использовать для обнаружения антигенов нижней плотности. Без эмбарго, колоранты в тандеме создают то, что фторхромы дают и эффективность передачи энергии варьируется от другого, что усложняет компенсацию.

6. Ионы металлических песков

Металлические ионы не имеют ограничений по флуоресценции, но также упоминаются об этом.

Лос-антикуэрпос, использованный в цитометрии массива, не является сопряженным с флуоресцентным веществом, так как оно сопряжено с ионами металлов в песках из одного изотопа в серии лос-лантанидос. В действительности имеется 35 изотопов лантанидов, доступных в коммерческих целях для соединения антикварных изделий. Эти звуки не являются флуоресцентными и только подходят для цитометрии масс.

7. Флуоресцентный белок

Флуоресцентные белки можно использовать с частотой, как системы информирования, для естественного выражения. Больше всего используется зеленый флуоресцентный белок (GFP) Aequorea victoria. Это происходит из CFP и YFP.

Красный флуоресцентный белок (DsRed) является производным анемоны от марка хонго Discosoma, а также проксимальным поколением флуоресцентных мономерных белков (mCherry, mBanana) является производным DsRed и имеет спектры излучения и возбуждения.

Благодаря технологии клонирования генов существуют флуоресцентные белки, cuyos спектры возбуждения и излучения ультрафиолетового излучения в инфракрасном диапазоне.

8. Нуклеарный оттенок

Цвета нуклеиновой кислоты есть в ВОПОГ, в АРН или в другом месте. Можно использовать для подсчета ADN для анализа циклического клеточного цикла (стр. например, PI, 7-AAD, DyeCycle Violet, DAPI), классификации хромосом (стр. например, Hoescht 33342, хромомицин A3), классифицировать клетки посредническим анализом населения. латеральный (p. ej., Hoescht 33342), Live y las células muertas se diferencian y las бактерии se clasifican.

Уровень распространения может определяться комбинацией красителей нуклеиновой кислоты с другим маркером, как соединение антибромдезоксиуридина с флуоресцентным красителем (BrdU).

9. Цвета клеточного распространения

Клеточное распространение происходит в инкубаторе клеток с BrdU (бромдезоксиуридином), что включает в себя синтез клеточного ADN и затем происходит с антикуэрпосом и оттенками ADN, направленными против BrdU. Без эмбарго этот метод не подходит для изучения распространения на большой площади.

Сукцинимидный эфир карбоксифлуоресценции (CFSE) можно использовать для увеличения количества делений клеток в процессе распространения. Варианты цветов и дней CFSE также доступны уже сейчас. При соответствующих концентрациях эти оттенки не влияют на рост или морфологию клеток, поэтому они подходят для изучения распространения на большой площади.

10. Тинт де мертве на клеточном уровне

Жизнедеятельность клеток может определяться медианным выделением красителей (например, йодуро де пропидио, DAPI) или медиантом объединения красителей с внутриклеточными аминами.

Цвета исключений не могут быть обнаружены и соло являются подходящими для клеток, которые не являются инфицированными и требуют немедленного анализа.

Оттенки амины, включая живых/мертвых (ThermoFisher), зомби (Biolegend) или фиксируемую жизнеспособность (BD Biosciences), которые подходят для клеточных и инфекционных клеток, для инфекционных клеток, для инфицированных клеток, для внутриклеточных антигенов, для фижадных клеток. параформальдегидо.

11. Цветной индикатор кальция.

Поэкспериментируйте с цветовыми индикаторами кальция, чтобы изменить цвет в мире кальция, и их можно использовать для индикации активации и сенсации сотового телефона.

Больше всего красителей используется, когда используется индо-1, двухфазный УФ-фильтр. Там же есть кальций азуль-зеленого цвета для флюо-3.