Fluoreszierende Farbstoffe, die für die beschriftete Oligraphie verwendet werden

Als Träger genetischer Informationen und materieller Grundlage der Genexpression spielt die DNA eine äußerst wichtige Rolle für Wachstum, Entwicklung, Alterung, Genetik und Mutation des Organismus. Derzeit gibt es viele Analysemethoden zur DNA-Bestimmung. Unter diesen ist die Fluoreszenzsondentechnologie ein wichtiges technisches Mittel zur Überwachung der Echtzeitüberwachung auf molekularer Ebene mithilfe hochempfindlicher optischer Detektionsgeräte.

 

1、Fluoreszenzlöschung

Unter Fluoreszenzlöschung versteht man im Allgemeinen den Prozess der Verringerung der Fluoreszenzintensität durch physikalische oder chemische Effekte zwischen Fluoreszenzmolekülen durch das Lösungsmittel oder entsprechende Lösungsmittel. Dabei wird der Grundzustand der leuchtenden Moleküle um ein gewisses Maß verkürzt.

Es gibt im Allgemeinen zwei Arten der Fluoreszenzlöschung: dynamisches Löschen und statisches Löschen. Diese Substanzen, die eine Fluoreszenzlöschung verursachen können, werden als Fluoreszenzlöschmittel bezeichnet. Durch die Fluoreszenzlöschung wird die Fluoreszenzquantenausbeute fluoreszierender Substanzen erheblich verringert. Die Fluoreszenzlöschung äußert sich auch in der Ausdehnung molekularer Kollisionen, im Verschwinden oder Metastasieren der eigenen Energie und in der Löschung äußerer Kräfte.

2. Die Anwendung des fluoreszierenden Schnur-Oligonukleotids

Die Anwendung des Fluoreszenz-Alignment-Oligonukleotids ist das Prinzip der Nukleinsäure-Hybridisierung. Durch die Durchführung verschiedener Formen der Hybridisierung mit den Ziel-Nukleinsäuremolekülen und anschließender Verwendung der entsprechenden Fluoreszenzsonden-Detektionstechnologie wird die Ziel-DNA oder -RNA analysiert. Bei der diagnostischen Testmethode im Zusammenhang mit der Anwendung von Oligonukleotiden ist die Fluoreszenzdetektion (z. B. QPCR auf Basis von Fluoreszenzsonden) eine äußerst wichtige Technologie. Beispielsweise erfordern einige spezifische Anwendungen der DNA-SANGER-Sequenzierung und In-situ-Hybridisierung (z. B. FISH), Oligonukleotide eine einzelne Markierung, und die Sonde für die Echtzeit-Fluoreszenzdetektion (Fluoreszenzgruppenlöschmittel-Sonde) und die Sonde (Molecular Beacon) zur Identifizierung gleicher Gene sind Doppelmarkierungen. Auch wenn das fluoreszierende Basisgruppenlöschmittel verwendet wird, kann eine dynamische Löschung durch FRET (Fluoreszenzresonanzenergietransfer) oder Kollisionslöschung erfolgen. Der Löschmechanismus hängt vom Sondentyp ab. Im Allgemeinen wird die Sonde geöffnet, um den Abstand zwischen der fluoreszierenden Gruppe und dem Löschmittel zu vergrößern und die Löschung zu stoppen (Molecular Beacon), oder die fluoreszierende Gruppe oder das Löschmittel wird punktförmig (TAQMAN-Sonde) gerissen (am häufigsten).

3、Fluoreszierende Gruppe

1. Fluoreszenzmarkierung

Es gibt viele Methoden für Oligonukleotide zur Markierung von Fluoreszenzfarbstoffen, und die Auswahl der Markierung ist vielfältig, was mit dem Chlorid des Aromarings zusammenhängt – dieses bestimmt die Fluoreszenzauslösung des Farbstoffs. Das 6-FAM-CE-Phosphoramidit, das 6-Hex-CE-Phosphoramidit und das 6-CE-Phosphoramidit des 6-FAM-CE-Phosphoramidits, das 6-Hex-CE-Phosphoramidit des Derivats des Derivats des Derivats des Derivats des Derivats des Derivats der Derivat-Selbstderivate können für wirksame Markierungen von Oligukleotid 5' verwendet werden.

Die anderen beiden Arten von Subphosphorizidmonomeren, die für Oligonukleotid-Fluorescein verwendet werden können: 6-FluoreScein-CE-Phosphoramidit und FluoreScein-CE-Phosphoramidit. Beide Monomere enthalten Fluoreszenzfarbstoffe derselben Fluoreszenzfarbstoffe wie 6-FAM CE Phosphoramidit. , Aber anderes verbundenes Skelett. 6-fluoreScein-CE Phosphoramidit hat eine 1,3-Glykolstruktur und zusätzliches OH ist durch DMTR geschützt. Auf diese Weise kann es nicht nur durch die Freisetzungsüberwachung des DMTR selbst überwacht werden, sondern auch mehrfach im Oligonukleotid hinzugefügt werden, das zur chromosomalen Färbung verwendet werden kann. Dies erfordert jedoch normalerweise einen Verbinder (z. B. Spacer-18) zwischen jeder Zugabe, um zu verhindern, dass Fluorescein gelöscht wird. FluoreScein-CE Phosphoramidit bietet die gleichen Möglichkeiten wie 6-FluoreScein-CE Phosphoramidit, aber in diesem Fall sind die Verbindungen über Schwefelbindungen mit der Fluoreszenz verbunden.