Pewarna fluoresen digunakan untuk label oligrafi

DNA, sebagai pembawa informasi genetik dan bahan dasar ekspresi gen, memainkan peran yang sangat penting dalam pertumbuhan, perkembangan, penuaan, genetik, dan mutasi suatu organisme. Saat ini, terdapat banyak metode analisis untuk menentukan DNA. Diantaranya, teknologi probe fluoresen merupakan sarana teknis penting untuk memantau pemantauan real-time pada tingkat molekuler dengan bantuan peralatan deteksi optik sensitivitas tinggi.

 

1, pendinginan neon

Pendinginan fluoresen umumnya mengacu pada proses penurunan intensitas fluoresen melalui efek fisik atau kimia antara molekul fluoresensi melalui pelarut atau pelarut yang sesuai. Dalam proses ini, keadaan dasar molekul bercahaya akan diperpendek sampai batas tertentu.

Pendinginan fluoresen umumnya memiliki dua jenis: pendinginan dinamis dan pendinginan statis. Zat yang dapat menyebabkan pendinginan fluoresen ini disebut zat pemadam fluoresen, dan pendinginan fluoresen membuat hasil kuantum fluoresen dari zat fluoresensi sangat berkurang. Pendinginan fluoresen juga diwujudkan dalam tumbukan molekuler, hilangnya atau metastasis energinya sendiri, dan pemadaman kekuatan eksternal.

2. Penerapan oligonukleotida tali fluoresen

Penerapan oligonukleotida penyelarasan fluoresen adalah prinsip hibridisasi asam nukleat. Dengan melakukan berbagai bentuk hibridisasi dengan molekul asam nukleat target, dan kemudian teknologi deteksi probe fluoresen yang relevan digunakan untuk menganalisis DNA atau RNA target. Dalam metode uji diagnostik yang terkait dengan penerapan oligonukleotida, deteksi fluoresensi (seperti QPCR berdasarkan probe fluoresen) merupakan jenis teknologi yang sangat penting. Misalnya, beberapa aplikasi spesifik sekuensing DNA SANGER dan hibridisasi in-situ (seperti FISH), oligonukleotida memerlukan tanda tunggal, dan probe untuk deteksi fluoresen waktu nyata (probe agen pemadam kelompok fluoresen) Dan probe (suar molekuler) untuk mengidentifikasi gen yang sama adalah tanda ganda. Sekalipun zat pemadam kelompok basa fluoresen digunakan, pendinginan dinamis dapat terjadi melalui FRET (transfer energi resonansi fluoresen) atau pendinginan tumbukan. Mekanisme pendinginan terkait dengan jenis probe. Secara umum, probe dibuka untuk meningkatkan jarak antara kelompok fluoresen dan zat pendingin untuk menghentikan pendinginan (suar molekul), atau kelompok fluoresen atau zat pendingin akan menjadi titik retak (probe TAQMAN) (paling umum).

3. Kelompok neon

1. label fluoresensi

Ada banyak metode bagi oligonukleotida untuk memberi label pada pewarna fluoresen, dan pilihan pelabelannya beragam, yang terkait dengan klorida pada cincin aroma - ini menentukan pelepasan fluoresen dari pewarna tersebut. Fosforamidit 6-FAM CE, Fosforamidit 6-Hex CE, dan Fosforamidit 6-CE dari Fosforamidit 6-FAM CE, Fosforamidit 6-Hex CE dari turunan dari turunan dari turunan dari turunan dari turunan turunan sendiri dapat digunakan untuk tanda efektif oligukleotida 5'.

Dua jenis monomer sub-fosforisida lainnya yang dapat digunakan untuk fluorescein oligonukleotida: 6-FluoreScein-CE Phosphoramidite dan FluoreScein-CE Phosphoramidite. Kedua monomer ini mengandung pewarna fluoresen dari pewarna fluoresen yang sama dengan Fosforamidit 6-FAM CE. , Tapi kerangka terkait yang berbeda. 6-fluoreScein-CE Phosphoramidite memiliki struktur 1,3 glikol, dan OH tambahan dilindungi oleh DMTR. Dengan cara ini, tidak hanya dapat dipantau bahkan dengan pemantauan pelepasan DMTR, tetapi juga dapat ditambahkan beberapa kali ke dalam oligonukleotida, yang dapat digunakan untuk pewarnaan kromosom. Namun, hal ini biasanya memerlukan konektor (seperti Spacer-18) di antara setiap penambahan untuk mencegah fluorescein padam. FluoreScein-CE Phosphoramidite memberikan kemungkinan yang sama seperti 6-FluoreScein-CE Phosphoramidite, namun dalam kasus ini, sambungan dihubungkan ke fluoresensi melalui ikatan belerang.