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Vues : 24 Auteur : Éditeur du site Heure de publication : 2023-08-08 Origine : Site
L'ADN, en tant que support de l'information génétique et fondement matériel de l'expression des gènes, joue un rôle extrêmement important dans la croissance, le développement, le vieillissement, la génétique et la mutation de l'organisme. Il existe actuellement de nombreuses méthodes d’analyse pour déterminer l’ADN. Parmi eux, la technologie des sondes fluorescentes est un moyen technique important pour surveiller la surveillance en temps réel au niveau moléculaire à l'aide d'un équipement de détection optique à haute sensibilité.
L'extinction fluorescente fait généralement référence au processus d'abaissement de l'intensité fluorescente grâce aux effets physiques ou chimiques entre les molécules fluorescentes via le solvant ou les solvants correspondants. Dans ce processus, l’état de base des molécules lumineuses sera raccourci dans une certaine mesure.
La trempe fluorescente est généralement de deux types : la trempe dynamique et la trempe statique. Ces substances qui peuvent provoquer une extinction fluorescente sont appelées agents d'extinction fluorescente, et l'extinction fluorescente réduit considérablement le rendement quantique fluorescent des substances fluorescentes. L'extinction fluorescente se manifeste également par des collisions d'husion moléculaires, la disparition ou des métastases de sa propre énergie et l'extinction des forces externes.
L'application de l'oligonucléotide d'alignement fluorescent est le principe de l'hybridation des acides nucléiques. En effectuant diverses formes d'hybridation avec les molécules d'acide nucléique cibles, la technologie de détection de sonde fluorescente appropriée est ensuite utilisée pour analyser l'ADN ou l'ARN cible. Dans la méthode de test de diagnostic liée à l'application d'oligonucléotides, la détection de fluorescence (telle que la QPCR basée sur des sondes fluorescentes) est un type de technologie extrêmement important. Par exemple, par exemple, dans certaines applications spécifiques du séquençage de l'ADN SANGER et de l'hybridation in situ (telles que FISH), l'oligonucléotide nécessite une seule marque, et la sonde pour la détection fluorescente en temps réel (sonde d'agent d'extinction de groupe fluorescent) et la sonde (balise moléculaire) pour l'identification de gènes égaux sont des marques doubles. Même si l'agent d'extinction de groupe de base fluorescent est utilisé, une extinction dynamique peut se produire par FRET (transfert d'énergie de résonance fluorescente) ou une extinction par collision. Le mécanisme de trempe est lié au type de sonde. D'une manière générale, la sonde est ouverte pour augmenter la distance entre le groupe fluorescent et l'agent d'extinction afin d'arrêter l'extinction (balise moléculaire), ou le groupe fluorescent ou l'agent d'extinction sera fissuré ponctuellement (sonde TAQMAN) (le plus courant).
1. étiquette fluorescente
Il existe de nombreuses méthodes permettant aux oligonucléotides de marquer les colorants fluorescents, et le choix du marquage est diversifié, en fonction du chlorure du cycle aromatique, qui détermine le lancement fluorescent du colorant. Le phosphoramidite 6-FAM CE, le phosphoramidite 6-Hex CE et le phosphoramidite 6-CE du phosphoramidite 6-FAM CE, le phosphoramidite 6-Hex CE du dérivé du dérivé du dérivé du dérivé du dérivé auto-dérivé peuvent être utilisés pour des marquages efficaces de l'oligucléotide 5'.
Les deux autres types de monomères sous-phosphoricides pouvant être utilisés pour l'oligonucléotide fluorescéine : 6-FluoreScéine-CE Phosphoramidite et FluoreScéine-CE Phosphoramidite. Ces deux monomères comprennent des colorants fluorescents des mêmes colorants fluorescents que le phosphoramidite 6-FAM CE. , Mais un squelette lié différent. Le phosphoramidite 6-fluoreScéine-CE a une structure 1,3 glycol et l'OH supplémentaire est protégé par le DMTR. De cette façon, il peut non seulement être surveillé par le contrôle de libération du DMTR, mais peut également être ajouté plusieurs fois dans l'oligonucléotide, qui peut être utilisé pour la teinture chromosomique. Cependant, cela nécessite généralement un connecteur (tel que Spacer-18) entre chaque ajout pour empêcher la fluorescéine de s'éteindre. FluoreScein-CE Phosphoramidite offre la même possibilité que le 6-FluoreScein-CE Phosphoramidite, mais dans ce cas, les joints sont connectés à la fluorescence via des liaisons soufre.
