الأصباغ الفلورية المستخدمة في الكتابة بالحفر المسمى

يلعب الحمض النووي، باعتباره حامل المعلومات الوراثية والأساس المادي للتعبير الجيني، دورًا مهمًا للغاية في نمو الكائن الحي وتطوره وشيخوخةه وتحوله الجيني. في الوقت الحاضر، هناك العديد من طرق التحليل لتحديد الحمض النووي. من بينها، تعد تقنية مسبار الفلورسنت وسيلة تقنية مهمة لمراقبة المراقبة في الوقت الفعلي على المستوى الجزيئي بمساعدة معدات الكشف البصري عالية الحساسية.

 

1 、 التبريد الفلورسنت

يشير تبريد الفلورسنت عمومًا إلى عملية خفض شدة الفلورسنت من خلال التأثيرات الفيزيائية أو الكيميائية بين جزيئات الفلورسنت من خلال المذيب أو المذيبات المقابلة. في هذه العملية، سيتم تقصير الحالة الأساسية للجزيئات المضيئة إلى حد ما.

يحتوي التبريد الفلوري بشكل عام على نوعين: التبريد الديناميكي والتبريد الساكن. تسمى هذه المواد التي يمكن أن تسبب التبريد الفلورسنت عوامل التبريد الفلورسنت، وتبريد الفلورسنت يقلل بشكل كبير من العائد الكمي للفلورسنت من المواد الفلورية. يتجلى التبريد الفلوري أيضًا في امتداد تصادمات الاندماج الجزيئي، واختفاء أو ورم طاقته الخاصة، وإخماد القوى الخارجية.

2. تطبيق قليل النوكليوتيد الحبل الفلورسنت

تطبيق أليغنوكليوتيد محاذاة الفلورسنت هو مبدأ تهجين الحمض النووي. من خلال إجراء أشكال مختلفة من التهجين مع جزيئات الحمض النووي المستهدفة، ومن ثم يتم استخدام تقنية الكشف عن مسبار الفلورسنت ذات الصلة لتحليل الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي (RNA) المستهدف. في طريقة الاختبار التشخيصي المتعلقة بتطبيق قليل النوكليوتيد، يعد الكشف الفلوري (مثل QPCR المعتمد على مجسات الفلورسنت) نوعًا مهمًا للغاية من التكنولوجيا. على سبيل المثال، على سبيل المثال، بعض التطبيقات المحددة لتسلسل DNA SANGER والتهجين في الموقع (مثل FISH)، يتطلب قليل النوكليوتيد علامة واحدة، ومسبار الكشف الفلوري في الوقت الحقيقي (مسبار عامل تبريد مجموعة الفلورسنت) والمسبار (المنارة الجزيئية) لتحديد الجينات المتساوية هما علامات مزدوجة. حتى لو تم استخدام عامل التبريد للمجموعة الأساسية الفلورية، يمكن أن يحدث التبريد الديناميكي من خلال FRET (نقل طاقة الرنين الفلوري) أو التبريد الاصطدامي. ترتبط آلية التبريد بنوع المسبار. بشكل عام، يتم فتح المسبار لزيادة المسافة بين مجموعة الفلورسنت وعامل التبريد لإيقاف التبريد (المنارة الجزيئية)، أو أن مجموعة الفلورسنت أو عامل التبريد ستكون نقطة (مسبار TAQMAN) (الأكثر شيوعًا).

3 、 مجموعة الفلورسنت

1. تسمية مضان

هناك العديد من الطرق لأليغنوكليوتيد لتسمية الأصباغ الفلورية، واختيار العلامات متنوع، وهو ما يرتبط بكلوريد حلقة الرائحة - وهذا يحدد إطلاق الفلورسنت للصبغة. يمكن استخدام 6-FAM CE Phosphoramidite، و6-Hex CE Phosphoramidite، و6-CE Phosphoramidite من 6-FAM CE Phosphoramidite، و6-Hex CE Phosphoramidite من مشتق مشتق مشتق المشتقات الذاتية المشتقة للعلامات الفعالة للأوليجوكليوتيد 5 '.

النوعان الآخران من مونومرات مبيد الفوسفور الفرعي التي يمكن استخدامها لفلوريسئين قليل النوكليوتيد: 6-FluoreScein-CE Phosphoramidite وFluoreScein-CE Phosphoramidite. يشتمل كلا هذين المونومرين على أصباغ الفلورسنت من نفس الأصباغ الفلورية مثل 6-FAM CE Phosphoramidite. ولكن هيكل عظمي مرتبط مختلف. يحتوي 6-fluoreScein-CE Phosphoramidite على بنية 1,3 جلايكول، ويتم حماية OH الإضافي بواسطة DMTR. بهذه الطريقة، لا يمكن مراقبته فقط من خلال مراقبة إطلاق DMTR، ولكن يمكن أيضًا إضافته عدة مرات في قليل النوكليوتيد، والذي يمكن استخدامه لصبغ الكروموسومات. ومع ذلك، يتطلب هذا عادةً وجود موصل (مثل Spacer-18) بين كل إضافة لمنع الفلورسين من التبريد. يوفر FluoreScein-CE Phosphoramidite نفس الإمكانية التي يوفرها 6-FluoreScein-CE Phosphoramidite، ولكن في هذه الحالة، ترتبط المفاصل بالفلورة عبر روابط الكبريت.