Language
Görüntüleme: 22 Yazar: Site Editörü Yayınlanma Zamanı: 2023-08-08 Kaynak: Alan
Genetik bilginin taşıyıcısı ve gen ifadesinin maddi temeli olan DNA, organizmanın büyümesinde, gelişmesinde, yaşlanmasında, genetik ve mutasyonunda son derece önemli bir rol oynar. Günümüzde DNA'nın belirlenmesine yönelik birçok analiz yöntemi bulunmaktadır. Bunların arasında floresan prob teknolojisi, yüksek hassasiyetli optik algılama ekipmanının yardımıyla moleküler düzeyde gerçek zamanlı izlemeyi izlemek için önemli bir teknik araçtır.
Floresan söndürme genel olarak, floresans molekülleri arasındaki fiziksel veya kimyasal etkiler yoluyla solvent veya karşılık gelen solventler aracılığıyla floresan yoğunluğunun azaltılması sürecini ifade eder. Bu süreçte ışık saçan moleküllerin baz durumu bir miktar kısaltılacaktır.
Floresan söndürmenin genellikle iki türü vardır: dinamik söndürme ve statik söndürme. Floresan söndürmeye neden olabilen bu maddelere floresan söndürme maddeleri denir ve floresan söndürme, floresan maddelerin floresan kuantum verimini büyük ölçüde azaltır. Floresan söndürme aynı zamanda moleküler husion çarpışmalarının uzamasında, kendi enerjisinin kaybolmasında veya metastazında ve dış kuvvetlerin söndürülmesinde de kendini gösterir.
Floresan hizalama oligonükleotidinin uygulanması, nükleik asit hibridizasyonunun ilkesidir. Hedef nükleik asit molekülleri ile çeşitli hibridizasyon formları gerçekleştirilerek hedef DNA veya RNA'nın analizi için ilgili floresan prob tespit teknolojisi kullanılır. Oligonükleotid uygulamasına ilişkin teşhis test yönteminde, floresans tespiti (floresan problara dayanan QPCR gibi) son derece önemli bir teknoloji türüdür. Örneğin, DNA SANGER dizilimi ve yerinde hibridizasyonun (FISH gibi) bazı spesifik uygulamaları, oligonükleotid tek bir işaret gerektirir ve gerçek zamanlı floresan tespiti için prob (floresan grup söndürücü ajan probu) ve eşit genlerin tanımlanması için prob (moleküler işaret) ikili işaretlerdir. Floresan baz grubu söndürme maddesi kullanılsa bile, FRET (floresan rezonans enerji aktarımı) veya çarpışma söndürme yoluyla dinamik söndürme meydana gelebilir. Söndürme mekanizması prob tipine bağlıdır. Genel olarak konuşursak, prob, söndürmeyi durdurmak için floresan grup ile söndürme maddesi arasındaki mesafeyi artırmak için açılır (moleküler işaret) veya floresan grup veya söndürme maddesi Nokta (TAQMAN probu) çatlaması (en yaygın) olacaktır.
1. floresan etiketi
Floresan boyaları etiketlemek için oligonükleotid için pek çok yöntem vardır ve aroma halkasının klorürüyle ilgili olan etiketleme seçimi çeşitlidir; bu, boyanın floresan lansmanını belirler. 6-FAM CE Fosforamidit, 6-Hex CE Fosforamidit ve 6-CE Fosforamidit, 6-FAM CE Fosforamidit, 6-Hex CE Fosforamidit türevinin türevinin türevinin türevinin kendi türevleri, oligukleotid 5'in etkili işaretleri için kullanılabilir.
Oligonükleotid fluoresein için kullanılabilecek diğer iki tip alt fosforisit monomer: 6-FluoreScein-CE Fosforamidit ve FluoreScein-CE Fosforamidit. Bu monomerlerin her ikisi de 6-FAM CE Fosforamidit ile aynı floresan boyaların floresan boyalarını içerir. , Ama Farklı bağlantılı iskelet. 6-floroScein-CE Fosforamidit 1,3 glikol yapısına sahiptir ve ilave OH, DMTR tarafından korunur. Bu sayede hem DMTR'nin salınımının izlenmesiyle izlenebilmekte, hem de kromozomal boyama için kullanılabilen oligonükleotide birden çok kez eklenebilmektedir. Bununla birlikte, bu genellikle floresanın sönmesini önlemek için her ekleme arasında bir konektör (Spacer-18 gibi) gerektirir. FluoreScein-CE Fosforamidit, 6-FluoreScein-CE Fosforamidit ile aynı olasılığı sağlar ancak bu durumda eklemler, kükürt bağları aracılığıyla floresansa bağlanır.
