Tintes fluorescentes utilizados para oligrafía etiquetados.

El ADN, como portador de información genética y base material de la expresión genética, juega un papel extremadamente importante en el crecimiento, desarrollo, envejecimiento, genética y mutación del organismo. En la actualidad existen muchos métodos de análisis para determinar el ADN. Entre ellos, la tecnología de sondas fluorescentes es un medio técnico importante para monitorear el monitoreo en tiempo real a nivel molecular con la ayuda de equipos de detección óptica de alta sensibilidad.

 

1 、 extinción fluorescente

La extinción de la fluorescencia generalmente se refiere al proceso de reducir la intensidad de la fluorescencia mediante los efectos físicos o químicos entre las moléculas de fluorescencia a través del disolvente o los disolventes correspondientes. En este proceso se acorta hasta cierto punto el estado básico de las moléculas luminosas.

El enfriamiento fluorescente generalmente tiene dos tipos: enfriamiento dinámico y enfriamiento estático. Estas sustancias que pueden provocar la extinción de la fluorescencia se denominan agentes de extinción de la fluorescencia, y la extinción de la fluorescencia reduce considerablemente el rendimiento cuántico fluorescente de las sustancias fluorescentes. La extinción fluorescente también se manifiesta en la extensión de colisiones de husiones moleculares, la desaparición o metástasis de su propia energía y la extinción de fuerzas externas.

2.La aplicación del oligonucleótido de cordón fluorescente.

La aplicación del oligonucleótido de alineación fluorescente es el principio de la hibridación de ácidos nucleicos. Al realizar diversas formas de hibridación con las moléculas de ácido nucleico objetivo, y luego se utiliza la tecnología de detección de sonda fluorescente relevante para analizar el ADN o ARN objetivo. En el método de prueba de diagnóstico relacionado con la aplicación de oligonucleótidos, la detección de fluorescencia (como la QPCR basada en sondas fluorescentes) es un tipo de tecnología extremadamente importante. Por ejemplo, en algunas aplicaciones específicas de secuenciación de ADN SANGER e hibridación in situ (como FISH), los oligonucleótidos requieren una sola marca, y la sonda para la detección fluorescente en tiempo real (sonda de agente de extinción de grupos fluorescentes) y la sonda (baliza molecular) para la identificación de genes iguales son marcas duales. Incluso si se utiliza el agente de extinción del grupo base fluorescente, la extinción dinámica puede ocurrir mediante FRET (transferencia de energía por resonancia fluorescente) o extinción por colisión. El mecanismo de extinción está relacionado con el tipo de sonda. En términos generales, la sonda se abre para aumentar la distancia entre el grupo fluorescente y el agente de extinción para detener la extinción (baliza molecular), o el grupo fluorescente o el agente de extinción se agrietará puntualmente (sonda TAQMAN) (el más común).

3 、 grupo fluorescente

1. etiqueta de fluorescencia

Existen muchos métodos para que los oligonucleótidos marquen tintes fluorescentes, y la elección del etiquetado es diversa, lo que está relacionado con el cloruro del anillo aromático, lo que determina la liberación fluorescente del tinte. La fosforamidita 6-FAM CE, la fosforamidita 6-Hex CE y la fosforamidita 6-CE de la fosforamidita 6-FAM CE, la fosforamidita 6-Hex CE del derivado del derivado del derivado del derivado de los autoderivados derivados se pueden utilizar para marcas efectivas de oligucleotida 5'.

Los otros dos tipos de monómeros subfosforicidas que se pueden utilizar para la fluoresceína oligonucleotídica: fosforamidita 6-FluoreScein-CE y fosforamidita FluoreScein-CE. Ambos monómeros incluyen tintes fluorescentes de los mismos tintes fluorescentes que la fosforamidita 6-FAM CE. , Pero esqueleto vinculado diferente. La fosforamidita 6-fluoreScein-CE tiene una estructura de 1,3 glicol y el OH adicional está protegido por DMTR. De esta manera, no sólo puede controlarse incluso mediante el control de la liberación de DMTR, sino que también puede añadirse varias veces al oligonucleótido, que puede utilizarse para el teñido cromosómico. Sin embargo, esto normalmente requiere un conector (como Spacer-18) entre cada adición para evitar que la fluoresceína se apague. La fosforamidita FluoreScein-CE ofrece las mismas posibilidades que la fosforamidita 6-FluoreScein-CE, pero en este caso, las uniones están conectadas a la fluorescencia mediante enlaces de azufre.