Corantes fluorescentes usados ​​para oligrafia rotulada

O DNA, como portador da informação genética e base material da expressão genética, desempenha um papel extremamente importante no crescimento, desenvolvimento, envelhecimento, genética e mutação do organismo. Atualmente, existem muitos métodos de análise para determinar o DNA. Entre eles, a tecnologia de sonda fluorescente é um meio técnico importante para monitorar o monitoramento em tempo real no nível molecular com a ajuda de equipamentos de detecção óptica de alta sensibilidade.

 

1、Extinção fluorescente

A extinção fluorescente geralmente se refere ao processo de redução da intensidade fluorescente através dos efeitos físicos ou químicos entre as moléculas de fluorescência através do solvente ou solventes correspondentes. Neste processo, o estado base das moléculas luminosas será encurtado até certo ponto.

A extinção fluorescente geralmente tem dois tipos: extinção dinâmica e extinção estática. Essas substâncias que podem causar extinção fluorescente são chamadas de agentes de extinção fluorescente, e a extinção fluorescente reduz bastante o rendimento quântico fluorescente das substâncias fluorescentes. A extinção fluorescente também se manifesta no prolongamento das colisões de husões moleculares, no desaparecimento ou metástase de sua própria energia e na extinção de forças externas.

2.A aplicação do oligonucleotídeo de cordão fluorescente

A aplicação do oligonucleotídeo de alinhamento fluorescente é o princípio da hibridização de ácidos nucleicos. Ao realizar várias formas de hibridização com as moléculas de ácido nucleico alvo e, em seguida, a tecnologia de detecção de sonda fluorescente relevante é usada para analisar o DNA ou RNA alvo. No método de teste diagnóstico relacionado à aplicação de oligonucleotídeos, a detecção de fluorescência (como QPCR baseado em sondas fluorescentes) é um tipo de tecnologia extremamente importante. Por exemplo, por exemplo, algumas aplicações específicas de sequenciamento de DNA SANGER e hibridização in-situ (como FISH), o oligonucleotídeo requer uma única marca, e a sonda para detecção fluorescente em tempo real (sonda de agente de extinção de grupo fluorescente) e a sonda (farol molecular) para a identificação de genes iguais são marcas duplas. Mesmo se o agente de extinção do grupo de bases fluorescentes for usado, a extinção dinâmica pode ocorrer através de FRET (transferência de energia de ressonância fluorescente) ou extinção de colisão. O mecanismo de extinção está relacionado ao tipo de sonda. De modo geral, a sonda é aberta para aumentar a distância entre o grupo fluorescente e o agente de extinção para interromper a extinção (farol molecular), ou o grupo fluorescente ou agente de extinção será craqueamento pontual (sonda TAQMAN) (mais comum).

3、Grupo fluorescente

1. rótulo de fluorescência

Existem muitos métodos para o oligonucleotídeo marcar corantes fluorescentes, e a escolha da marcação é diversa, que está relacionada ao cloreto do anel de aroma - isso determina o lançamento fluorescente do corante. A fosforamidita 6-FAM CE, a fosforamidita 6-Hex CE e a fosforamidita 6-CE da fosforamidita 6-FAM CE, a fosforamidita 6-Hex CE do derivado do derivado do derivado dos autoderivados derivados podem ser usadas para marcas eficazes de oligucleotide 5 '.

Os outros dois tipos de monômeros subfosforicidas que podem ser usados ​​para oligonucleotídeo fluoresceína: 6-FluoreScein-CE Fosforamidita e FluoreScein-CE Fosforamidita. Ambos os monômeros incluem corantes fluorescentes dos mesmos corantes fluorescentes do 6-FAM CE Fosforamidita. , Mas esqueleto vinculado diferente. A fosforamidita 6-fluoreScein-CE tem uma estrutura de 1,3 glicol e OH adicional é protegido por DMTR. Desta forma, ele não só pode ser monitorado até mesmo pelo monitoramento da liberação de DMTR, mas também pode ser adicionado múltiplas vezes no oligonucleotídeo, que pode ser usado para tingimento cromossômico. No entanto, isso geralmente requer um conector (como o Espaçador-18) entre cada adição para evitar a extinção da fluoresceína. A Fosforamidita FluoreScein-CE oferece a mesma possibilidade que a Fosforamidita 6-FluoreScein-CE, mas neste caso, as juntas são conectadas à fluorescência por meio de ligações de enxofre.