Флуоресцентные красители, используемые для олиграфии, маркируются

ДНК как носитель генетической информации и материальная основа экспрессии генов играет чрезвычайно важную роль в росте, развитии, старении, генетике и мутациях организма. В настоящее время существует множество методов анализа для определения ДНК. Среди них технология флуоресцентных зондов является важным техническим средством мониторинга в реальном времени на молекулярном уровне с помощью высокочувствительного оборудования оптического обнаружения.

 

1, тушение флуоресценции

Тушение флуоресценции обычно относится к процессу снижения интенсивности флуоресценции за счет физических или химических эффектов между молекулами флуоресценции через растворитель или соответствующие растворители. В этом процессе базовое состояние светящихся молекул будет в определенной степени сокращено.

Тушение флуоресценции обычно бывает двух типов: динамическое гашение и статическое гашение. Эти вещества, которые могут вызывать гашение флуоресценции, называются агентами тушения флуоресценции, а тушение флуоресценции значительно снижает квантовый выход флуоресценции флуоресцентных веществ. Тушение флуоресценции проявляется также в растяжении молекулярных столкновений, исчезновении или метастазировании собственной энергии, тушении внешних сил.

2. Применение олигонуклеотида флуоресцентного шнура.

Применение олигонуклеотида флуоресцентного выравнивания основано на принципе гибридизации нуклеиновых кислот. Путем выполнения различных форм гибридизации с целевыми молекулами нуклеиновой кислоты, а затем для анализа целевой ДНК или РНК используется соответствующая технология обнаружения флуоресцентных зондов. В методе диагностических испытаний, связанном с применением олигонуклеотидов, обнаружение флуоресценции (например, QPCR на основе флуоресцентных зондов) является чрезвычайно важным типом технологии. Например, в некоторых конкретных приложениях секвенирования ДНК SANGER и гибридизации in-situ (таких как FISH) олигонуклеотид требует одной метки, а зонд для флуоресцентного обнаружения в реальном времени (зонд с агентом гашения флуоресцентных групп) и зонд (молекулярный маяк) для идентификации равных генов представляют собой двойные метки. Даже если используется агент, гасящий флуоресцентную основную группу, динамическое гашение может происходить посредством FRET (перенос энергии флуоресцентного резонанса) или тушения столкновением. Механизм гашения связан с типом зонда. Вообще говоря, зонд открывается, чтобы увеличить расстояние между флуоресцентной группой и гасящим агентом, чтобы остановить гашение (молекулярный маяк), или флуоресцентная группа или гасящий агент будут точечными (зонд TAQMAN) растрескиваться (наиболее распространенный).

3, флуоресцентная группа

1. флуоресцентная этикетка

Существует множество методов олигонуклеотидной метки флуоресцентных красителей, причем выбор метки разнообразен, что связано с хлоридом ароматического кольца - это определяет флуоресцентный запуск красителя. Фосфорамидит 6-FAM CE, фосфорамидит 6-Hex CE и фосфорамидит 6-CE фосфорамидита 6-FAM CE, фосфорамидит 6-Hex CE производного производного производного производных производных можно использовать для эффективных меток олигуклеотида 5'.

Два других типа субфосфоридных мономеров, которые можно использовать для олигонуклеотидного флуоресцеина: 6-FluoreScein-CE фосфорамидит и FluoreScein-CE фосфорамидит. Оба этих мономера включают флуоресцентные красители тех же флуоресцентных красителей, что и 6-FAM CE фосфорамидит. , Но разные связанные скелеты. Фосфорамидит 6-fluoreScein-CE имеет структуру 1,3 гликоля, а дополнительный ОН защищен DMTR. Таким образом, его можно не только контролировать с помощью мониторинга высвобождения DMTR, но также можно многократно добавлять в олигонуклеотид, который можно использовать для хромосомного окрашивания. Однако для этого обычно требуется соединитель (например, Spacer-18) между каждым добавлением, чтобы предотвратить гашение флуоресцеина. Фосфорамидит FluoreScein-CE обеспечивает ту же возможность, что и фосфорамидит 6-FluoreScein-CE, но в этом случае стыки связаны с флуоресценцией через связи серы.