رنگ های فلورسنت مورد استفاده برای الیوگرافی برچسب دار

DNA به عنوان حامل اطلاعات ژنتیکی و پایه مادی بیان ژن، نقش بسیار مهمی در رشد، تکامل، پیری، ژنتیکی و جهش ارگانیسم دارد. در حال حاضر روش های تجزیه و تحلیل زیادی برای تعیین DNA وجود دارد. در میان آنها، فناوری کاوشگر فلورسنت یک ابزار فنی مهم برای نظارت بر نظارت بلادرنگ در سطح مولکولی با کمک تجهیزات تشخیص نوری با حساسیت بالا است.

 

1- خاموش کننده فلورسنت

خاموش کردن فلورسنت به طور کلی به فرآیند کاهش شدت فلورسنت از طریق اثرات فیزیکی یا شیمیایی بین مولکول های فلورسانس از طریق حلال یا حلال های مربوطه اشاره دارد. در این فرآیند، حالت پایه مولکول های درخشان تا حدودی کوتاه می شود.

کوئنچ فلورسنت به طور کلی دو نوع دارد: کوئنچ پویا و خاموش کننده استاتیک. این مواد که می توانند باعث خاموش شدن فلورسنت شوند، عوامل خاموش کننده فلورسنت نامیده می شوند و خاموش کردن فلورسنت باعث می شود بازده کوانتومی فلورسنت مواد فلورسانس تا حد زیادی کاهش یابد. خاموشی فلورسنت همچنین در کشش برخوردهای هیژن مولکولی، ناپدید شدن یا متاستاز انرژی خود و خاموش شدن نیروهای خارجی آشکار می شود.

2. کاربرد الیگونوکلئوتید طناب فلورسنت

استفاده از الیگونوکلئوتید تراز فلورسنت اصل هیبریداسیون اسید نوکلئیک است. با انجام اشکال مختلف هیبریداسیون با مولکول های اسید نوکلئیک هدف، و سپس از فناوری تشخیص پروب فلورسنت مربوطه برای تجزیه و تحلیل DNA یا RNA هدف استفاده می شود. در روش تست تشخیصی مربوط به کاربرد الیگونوکلئوتید، تشخیص فلورسانس (مانند QPCR بر اساس پروب های فلورسنت) یک نوع فناوری بسیار مهم است. به عنوان مثال، برخی از کاربردهای خاص توالی یابی DNA SANGER و هیبریداسیون درجا (مانند FISH)، الیگونوکلئوتید به یک علامت واحد نیاز دارد، و کاوشگر برای تشخیص فلورسنت بلادرنگ (کاوشگر عامل خاموش کننده گروه فلورسنت) و کاوشگر (فانوس دریایی مولکولی) برای نشانگرهای مشابه هستند. حتی اگر از عامل خاموش کننده گروه پایه فلورسنت استفاده شود، کوئنچ پویا می تواند از طریق FRET (انتقال انرژی تشدید فلورسنت) یا کونچینگ برخوردی رخ دهد. مکانیسم کوئنچ به نوع پروب مربوط می شود. به طور کلی، پروب برای افزایش فاصله بین گروه فلورسنت و ماده خاموش کننده باز می شود تا خاموش شدن (فانوس مولکولی) متوقف شود، یا گروه فلورسنت یا عامل خاموش کننده، ترک نقطه ای (کاوشگر TAQMAN) (شایع ترین) خواهد بود.

3-گروه فلورسنت

1. برچسب فلورسانس

روش های زیادی برای الیگونوکلئوتید برای برچسب زدن رنگ های فلورسنت وجود دارد، و انتخاب برچسب گذاری متنوع است، که به کلرید حلقه عطر مربوط می شود - این امر راه اندازی فلورسنت رنگ را تعیین می کند. فسفرامیدیت 6-FAM CE، فسفورامیدیت 6-هگز CE و فسفورامیدیت 6-CE از فسفورامیدیت 6-FAM CE، فسفورامیدیت 6-هگز CE از مشتقات مشتق مشتق از مشتقات مشتق از مشتقات مشتق از مشتقات اثربخش از خود استفاده می شود. '.

دو نوع دیگر از مونومرهای ساب فسفورکشی که می توانند برای الیگونوکلئوتید فلورسئین استفاده شوند: 6-FluoreScein-CE Phosphoramidite و FluoreScein-CE Phosphoramidite. هر دوی این مونومرها شامل رنگ‌های فلورسنت از همان رنگ‌های فلورسنت 6-FAM CE فسفورامیدیت هستند. , اما اسکلت پیوندی متفاوت. 6-fluoreScein-CE فسفورامیدیت دارای ساختار 1،3 گلیکول است و OH اضافی توسط DMTR محافظت می شود. به این ترتیب، نه تنها می توان آن را با نظارت بر انتشار DMTR حتی نظارت کرد، بلکه می تواند چندین بار به الیگونوکلئوتید اضافه شود، که می تواند برای رنگرزی کروموزومی استفاده شود. با این حال، این معمولاً به یک رابط (مانند Spacer-18) بین هر افزودنی نیاز دارد تا از خاموش شدن فلورسین جلوگیری کند. FluoreScein-CE Phosphoramidite همان امکان 6-FluoreScein-CE Phosphoramidite را فراهم می کند، اما در این حالت، اتصالات از طریق پیوندهای گوگردی به فلورسانس متصل می شوند.