Thuốc nhuộm huỳnh quang dùng cho in ảnh có nhãn

DNA, với vai trò là chất mang thông tin di truyền và là nền tảng vật chất của sự biểu hiện gen, đóng vai trò cực kỳ quan trọng trong quá trình sinh trưởng, phát triển, lão hóa, di truyền và đột biến của sinh vật. Hiện nay có nhiều phương pháp phân tích để xác định DNA. Trong số đó, công nghệ đầu dò huỳnh quang là phương tiện kỹ thuật quan trọng để theo dõi giám sát thời gian thực ở cấp độ phân tử với sự trợ giúp của thiết bị phát hiện quang học có độ nhạy cao.

 

1, dập tắt huỳnh quang

Quá trình dập tắt huỳnh quang thường đề cập đến quá trình giảm cường độ huỳnh quang thông qua các tác động vật lý hoặc hóa học giữa các phân tử huỳnh quang thông qua dung môi hoặc dung môi tương ứng. Trong quá trình này, trạng thái cơ bản của các phân tử phát sáng sẽ được rút ngắn ở một mức độ nhất định.

Quá trình dập tắt huỳnh quang thường có hai loại: dập tắt động và dập tắt tĩnh. Những chất có thể gây ra hiện tượng dập tắt huỳnh quang được gọi là chất dập tắt huỳnh quang, và việc dập tắt huỳnh quang làm cho hiệu suất lượng tử huỳnh quang của các chất huỳnh quang giảm đi rất nhiều. Quá trình dập tắt huỳnh quang còn được biểu hiện ở sự kéo dài của các va chạm phân tử, sự biến mất hoặc di căn của năng lượng của chính nó và sự dập tắt của ngoại lực.

2.Ứng dụng của oligonucleotide dây huỳnh quang

Ứng dụng của oligonucleotide liên kết huỳnh quang là nguyên tắc lai axit nucleic. Bằng cách thực hiện nhiều hình thức lai khác nhau với các phân tử axit nucleic mục tiêu, sau đó sử dụng công nghệ phát hiện đầu dò huỳnh quang thích hợp để phân tích DNA hoặc RNA mục tiêu. Trong phương pháp xét nghiệm chẩn đoán liên quan đến ứng dụng oligonucleotide, phát hiện huỳnh quang (như QPCR dựa trên đầu dò huỳnh quang) là một loại công nghệ cực kỳ quan trọng. Ví dụ, một số ứng dụng cụ thể của giải trình tự DNA SANGER và lai tại chỗ (chẳng hạn như FISH), oligonucleotide yêu cầu một dấu duy nhất và đầu dò để phát hiện huỳnh quang theo thời gian thực (đầu dò tác nhân dập tắt nhóm huỳnh quang) và đầu dò (đèn hiệu phân tử) để xác định các gen bằng nhau là dấu kép. Ngay cả khi sử dụng chất làm nguội nhóm bazơ huỳnh quang, quá trình làm nguội động có thể xảy ra thông qua FRET (truyền năng lượng cộng hưởng huỳnh quang) hoặc làm nguội do va chạm. Cơ chế dập tắt có liên quan đến loại đầu dò. Nói chung, đầu dò được mở ra để tăng khoảng cách giữa nhóm huỳnh quang và chất dập tắt nhằm ngăn chặn quá trình dập tắt (đèn hiệu phân tử), nếu không nhóm huỳnh quang hoặc chất dập tắt sẽ bị nứt Point (đầu dò TAQMAN) (phổ biến nhất).

3, Nhóm huỳnh quang

1. nhãn huỳnh quang

Có nhiều phương pháp để oligonucleotide dán nhãn thuốc nhuộm huỳnh quang và sự lựa chọn ghi nhãn rất đa dạng, có liên quan đến clorua của vòng thơm - điều này quyết định khả năng phóng huỳnh quang của thuốc nhuộm. Có thể sử dụng 6-FAM CE Phosphoramidite, 6-Hex CE Phosphoramidite và 6-CE Phosphoramidite của 6-FAM CE Phosphoramidite, 6-Hex CE Phosphoramidite của dẫn xuất của dẫn xuất của dẫn xuất của tự dẫn xuất của dẫn xuất của các dẫn xuất tự dẫn xuất để tạo dấu hiệu hiệu quả của oligucleotide 5'.

Hai loại monome phụ photpho hóa khác có thể được sử dụng cho fluorescein oligonucleotide: 6-FluoreScein-CE Phosphoramidite và FluoreScein-CE Phosphoramidite. Cả hai monome này đều bao gồm thuốc nhuộm huỳnh quang có cùng loại thuốc nhuộm huỳnh quang như 6-FAM CE Phosphoramidite. , Nhưng bộ xương liên kết khác nhau. 6-fluoreScein-CE Phosphoramidite có cấu trúc 1,3 glycol và OH bổ sung được bảo vệ bởi DMTR. Bằng cách này, nó không chỉ có thể được theo dõi bằng hoạt động giám sát phát hành của DMTR mà còn có thể được thêm nhiều lần vào oligonucleotide, chất này có thể được sử dụng để nhuộm nhiễm sắc thể. Tuy nhiên, điều này thường yêu cầu một đầu nối (chẳng hạn như Spacer-18) giữa mỗi lần bổ sung để ngăn chặn fluorescein bị dập tắt. FluoreScein-CE Phosphoramidite có khả năng tương tự như Phosphoramidite 6-FluoreScein-CE, nhưng trong trường hợp này, các mối nối được kết nối với huỳnh quang thông qua liên kết lưu huỳnh.