Введение в метод обработки ферментативной активности десенколадо

принцип:

Альфа-амилаза может захватить глюкозо-1,4 в кадену альмидона в декстрине каденовой коры, в результате чего мальтоза и глюкоза будут иметь разную долготу, и именно такой способ будет характерной реакцией альмидона на йод - лазурно-черный. эль-лазурь постепенно рассеивается и постепенно превращается в красный цвет. Скорость исчезновения вашего цвета связана с энзиматической активностью, поэтому энзиматическая активность может быть рассчитана в середине абсорбции раствора после реакции в существующих условиях.

Реактивы и решения:

Оригинальный раствор йода: 22,0 г йода из калия и растворитель примерно в 300 мл воды, собрать 11,0 г йода, растворить при перемешивании, перелить в матрац объемом 500 мл, положить с водой и перемешать в одном месте. botella marrón для заднего использования (preparado una vez al mes).

Раствор йода: добавьте 20,0 г йода из калия и растворите его в 300 мл воды, аккуратно соберите 2,00 мл оригинального раствора йода, перенесите на матрац афорадо в 500 мл, наберите в воду и перемешайте в бутылочке. Marron для заднего использования (preparado una vez al mes).

Раствор альмидона, растворимый в концентрации 20 г/л: 2,000 г раствора альмидона, растворимого (в основе сека), с точностью до 0,001 г, суспензия с водой, выдержанная в 70 мл воды, которую нужно перемешать и затем мыть. с 30 мл воды с разными осадками в сосуде с осадками, в котором содержится альмидон, если он включается в место, если он нагревается, и он находится в течение 2 минут, пока он полностью прозрачен, если он находится в температуре окружающей среды, он переносится на матрац объемом 100 мл и его разбавьте воду водой, чтобы она заполнилась. Это решение должно быть подготовлено к событию в день.

Тампон фосфатный (pH=6,0): Песар 45,23 г дезодидной фосфатной кислоты и 8,07 г цитрусовой кислоты, растворитель в воде и разбавитель в 1000 мл. Después de mezclar, калибр с уровнем pH.

Раствор хлористой кислоты c(HCl)=0,1моль/л.

Инструменты и оборудование:

Спектрофотометр, водяная баня с постоянной температурой 50–100 ℃, точность ±0,1 ℃, энсайо-трубка: 25 мм × 200 мм, объемный матрац, автоматическая пипетка, хронометр.

Подготовка ферментативного раствора к энсайару:

Приготовление жидкого фермента: приготовьте непосредственно с раствором тампона, следуя принципу, который активирует разбавленный фермент в диапазоне 3,7–5,6 Ед/мл (требуется оценка активности фермента для разбавления и многократного применения; если Активация фермента не ясна, и вы можете столкнуться с повторением).

Энсайо:

1. Вылейте из пипетки 20,0 мл растворимого раствора альмидона и 5,0 мл тампона из раствора в пробирку для энсайо, предварительно кальцинируйте и уравновесьте ванну с водой при постоянной температуре 60 °C в течение 5 минут.

2. Возраст 1,00 мл раствора разбавленного фермента, который нужно провести анализ, немедленно зарегистрируйте время с помощью хронометра, взболтайте и отреагируйте с точностью в течение 5 минут.

3. Немедленно влейте 1,00 мл реакционного раствора из пипетки, прокачайте в пробирке предварительно заправленной жидкости с 0,5 мл хлористого раствора 0,1 моль/л и 5,00 мл раствора разбавленного йода и возбужденного состояния.

4. Используйте 0,5 мл хлористого раствора 0,1 моль/л и 5,00 мл раствора йода разбавленного в виде белого реактива и быстрого впитывания (A) с кубиком диаметром 10 мм и длиной волны 660 нм. Перейдя к абсорбции, обратитесь к Приложению A (описано в стандарте QB-T 1803-93) и получите концентрацию (C) ферментативного раствора.

Определение ферментативной активности:

1 мл жидкого фермента, растворимый альмидон, в течение 1 часа при 60 ℃, pH = 6,0, представляет собой единую ферментативную активность, экспрессируемую в ед./мл.

расчетный:

X=C×n, X: энзиматическая активность муэстры, C: концентрация фермента пруэбы, n: фактор разбавления муэстры. Полученные результаты выражены в количестве участников.

Толерантность к результатам:

Ошибка относительно параллельных экспериментов не превышала 2%.