Introduction à la méthode d'évaluation de l'activité enzymatique de desencolado

principe :

L'α-amilasa peut couper l'enlacement du glucose α-1,4 dans la chaîne de l'almidón en dextrine de la chaîne courte, une petite quantité de maltosa et de glucose avec différentes longitudes, de façon à ce que la réaction spécifique de l'almidón au yodo soit bleu-noir. L'azul diminua progressivement et se transforma progressivement en marron rouge. La vitesse de disparition de votre couleur est liée à l'activité enzymatique, car l'activité enzimétique peut être calculée en midi pour l'absorption de la solution après la réaction dans des conditions normales.

Réactifs et solutions :

Solution de yodo originale : peser 22,0 g de yoduro de potasio et dissoudre dans environ 300 ml d'eau, ajouter 11,0 g de yodo, dissoudre avec agitation, puis transférer dans un matraz volumétrique de 500 ml, enraser avec de l'eau et stocker dans une bouteille de marron pour votre utilisation ultérieure. (préparé una vez al mes).

Solution diluée de yodo: Peser 20,0 g de yodo de potasio et dissoudre dans 300 ml d'eau, ajouter avec précision 2,00 ml de la solution originale de yodo, transférer tout cela dans un matraz aforado de 500 ml, enraser avec de l'eau et mettre dans une bouteille marron pour son utilisation postérieure (préparée una voyez-vous à moi).

Solution d'almidon soluble de 20 g/L: Pese 2.000 g de solution d'almidon soluble (à base sèche), avec une précision de 0.001 g, il y a une suspension d'eau, qui coule lentement dans 70 mL d'eau hirviendo avec agitation et ensuite verser avec 30 mL d'eau plusieurs fois dans l'eau. vaso de precipitados pequeño que contiene almidón, se incorpora la loción, se calienta y se hierve pendante 2 minutos hasta que esté complètement transparente, se enfría a temperatura ambiente, se transfiere a un matraz volumétrique de 100 ml y se diluye avec de l'eau hasta el enrase. Cette solution doit être préparée pour le même jour.

Tampon fosfato (pH=6,0) : Pesar 45,23 g de fosfato acide disodique et 8,07 g d'acide citrique, dissoudre dans l'eau et diluer à 1000 mL. Après le mezclar, calibre avec un pH moyen.

Solution d'acide chlorhydrique c(HCl)=0,1mol/L.

Instruments et équipements :

Spectrophotomètre, bain d'eau à température constante 50 ℃-100 ℃, précision ±0,1 ℃, tube de dosage : 25 mm × 200 mm, tube volumétrique, pipette automatique, chronomètre.

Préparation de la solution enzymatique à analyser :

Préparation de l'enzyme liquide : préparer directement avec une solution tampon, de manière à ce que l'activité de l'enzyme diluée soit dans une plage de 3,7 à 5,6 U/mL (cela nécessite l'estimation de l'activité de l'enzyme pour diluer à un multiple approprié ; si l'activité de l'enzyme n'est pas claire, elle vous pouvez tester à plusieurs reprises).

Ensayo :

1. Pipeter 20,0 ml de solution d'almidon soluble et 5,0 ml de solution tampon dans un tube de dosage et de précalentisation et équilibrer dans un bain d'eau à température constante de 60 °C pendant 5 minutes.

2. Ajoutez 1,00 ml de la solution d'enzyme diluée qui va être analysée, enregistrez immédiatement le temps avec un chronomètre, agitez bien et réagissez avec précision pendant 5 minutes.

3. Aspirez immédiatement 1,00 mL de la solution de réaction avec une pipette, caliez-la dans un tube de dosage préchargé avec 0,5 mL d'acide chlorhydrique 0,1 mol/L et 5,00 mL de solution de yodo dilué et agitez bien.

4. Utiliser un mélange de 0,5 mL d'acide clorhydrique 0,1 mol/L et 5,00 mL de solution de yodo dilué comme blanc réactif et moyen rapide de l'absorption (A) avec un cube de 10 mm et une longueur d'onde de 660 nm. Après l'absorption, consultez l'annexe A (recherchée sur la norme QB-T 1803-93) et obtenez la concentration (C) de la solution enzymatique.

Définition de l’activité enzymatique :

1 ml d'enzyme liquide, liqueur d'alcool soluble pendant 1 heure à 60 ℃, pH = 6,0, est une unité d'activité enzymatique, exprimée en U/mL.

calculer:

X = C × n, X : l'activité enzimática de la muestra, C : la concentration de l'enzyme de test, n : le facteur de dilution de la muestra. Les résultats obtenus sont exprimés en plusieurs points.

Tolérance des résultats :

L'erreur relative aux expériences parallèles ne dépasse pas le 2%.