Etkinleştirme İşlemi Yöntemine Giriş Desen Kodu Enzimleri

prensip:

α-amilasa, azar azar azar azar azar azar azar azar azar azar azar azar 1,4 glikozu bağlayarak almidón'un sol tarafında, farklı boylamlarda bir miktar maltoz ve glikoz içeren, yodo'daki azul-negra reaksiyonuna özgü bir moddur. Azul yavaş yavaş azalır ve kademeli olarak maviye dönüştürülür. Rengin bozulma hızı, enzim aktivitesiyle ilişkilidir, çünkü aktif enzim, mevcut koşullardaki reaksiyona rağmen çözüm emilimi sırasında hesaplanabilir.

Reaktifler ve Çözümler:

Orijinal Yodo Çözeltisi: 22,0 g potasyum tuzu ve yaklaşık 300 ml suda çözün, 11,0 g ekleyin, çalkalayarak çözün, 500 ml'lik bir matara aktarın, su ile doldurun ve bir şişede toplayın para su uso posterior (bir vez al mes hazırlayın).

Sıvı seyreltme çözümü: 20,0 g potasyum sıvısını 300 mL suda çözün, orijinal çözeltiden 2,00 mL hassasiyetle toplayın, ardından 500 mL'lik bir kovaya aktarın, suyu boşaltın ve daha sonra kullanmak üzere bir şişeye yerleştirin (hazırlanmış) bir vez al mes).

20 g/L'de çözünür alkali çözelti: 2.000 g çözünebilir alkali çözelti (tabanda), 0,001 g hassasiyette, su ile süspansiyon halinde, 70 mL su ile çalkalanarak ve 30 mL su ile sulandırılır. çeşitli şekillerde Almid içeren küçük bir çökelti kabında, konum eklenir, ısıtılır ve tamamen şeffaf olana kadar 2 dakika bekletilir, ortam sıcaklığına ısıtılır, 100 ml'lik bir mat hacime aktarılır ve su ile seyreltilir. Bu çözüm, günlük düzeni hazırlamanız gerekir.

Fosfat Tamponu (pH=6,0): 45,23 g disodyum fosfat ve 8,07 g asit sitrik asit, suda çözün ve 1000 mL'ye seyreltin. Bazı durumlarda, bir pH ortamıyla kalibre edin.

Asit klorid çözeltisi c(HCl)=0,1mol/L.

Enstrümanlar ve Ekipmanlar:

Spektrofotometro, su banyosu ve sıcaklığı sabit 50°C-100°C, hassasiyet ±0,1°C, boru borusu: 25 mm × 200 mm, yüksek hacimli, otomatik pipet, kronometre.

Analiz için enzim çözümünün hazırlanması:

Enzim sıvısının hazırlanması: enzim aktivitesinin 3,7-5,6 U/mL aralığında olması için doğrudan tampon çözümü ile hazırlayın (bu, uygun bir çoklu seyreltme için aktivite tahminini gerektirir; enzim aktivitesi uygun değilse) bu temizdir, tekrarlanması muhtemeldir).

- Ensayo:

1. 20,0 ml çözünebilir alüminyum çözeltisini ve 5,0 ml çözelti tamponunu bir test tüpüne pipetleyin ve ön takvime tabi tutun ve 5 dakika boyunca 60 °C sıcaklıkta sabit bir su banyosunda dengeleyin.

2. Analiz sonucu elde edilecek enzim çözeltisinden 1,00 ml seyreltin, süreyi anında bir kronometreye kaydedin, iki kez karıştırın ve 5 dakika boyunca hassas bir şekilde tepki verin.

3. Hemen bir pipetle 1,00 mL reaksiyon çözeltisi ekleyin, 0,5 mL önceden doldurulmuş bir tüpte 0,1 mol/L asitli klorlu çözelti ile 5,00 mL seyreltilmiş çözelti ekleyin ve iki kez karıştırın.

4. 0,5 mL 0,1 mol/L klorhidrik asit ve 5,00 mL iyot çözeltisini beyaz reaksiyonla seyreltin ve 10 mm'lik bir küp ve 660 nm uzunluğunda bir hızla absorbansı (A) kullanın. Alımı yapmak için Ek A'ya bakın (QB-T 1803-93 tarihli standartta kayıtlı) ve enzim çözümü konsantrasyonunu (C) elde edin.

Enzim aktivitesinin tanımı:

1 mL enzim sıvısı, 60°C'de 1 saat çözünür, pH=6,0, U/mL olarak ifade edilen bir enzim aktif enzim birimidir.

hesaplayıcı:

X=C×n, X: enzimin aktifleştirilmesi, C: enzimin konsantrasyonu, n: ekranın seyreltme faktörü. Elde edilen sonuçlar enteresan rakamlarla ifade edilir.

Sonuçların toleransı:

Deneylerle paralel olarak göreceli hata %2'den fazla değil.