Pengenalan Metode Pengolahan Aktivitas Enzim Desencolado

prinsip:

α-amilasa dapat merusak glukosa α-1,4 yang dimasukkan ke dalam dekstrin kadena kortase, sejumlah kecil maltosa dan glukosa pada garis bujur yang berbeda, cara reaksi khusus almidón al yodo adalah azul-negra. Birunya akan berkurang secara bertahap dan bertahap jika dikonversi menjadi merah muda. Kecepatan penghilangan warna tersebut berkaitan dengan aktivitas enzimatik, karena aktivitas enzimatik tersebut mungkin dihitung di tengah penyerapan larutan setelah reaksi dalam kondisi standar.

Reaktif dan Solusi:

Larutan yodo asli: Pesar 22,0 g de yoduro de potasio dan larut dalam kira-kira 300 ml air, tambahkan 11,0 g yodo, larutkan dengan agitasi, lalu pindahkan ke dalam wadah berisi volume 500 ml, masukkan air dan simpan dalam botol marron untuk penggunaan Anda posterior (persiapkan sekali lagi).

Larutan encer yodo: Pesar 20,0 g de yoduro de potasio dan larutkan dalam 300 mL de air, tambahkan dengan presisi 2,00 mL de la solución original de yodo, pindahkan ke matras sebelum 500 mL, enrasar con air dan almacenar en botella marrón untuk su uso posterior (mempersiapkan una sekali lagi).

Larutan almidón larut de 20 g/L: Ini 2.000 g larutan almidón larut (dalam hitungan detik), dengan presisi 0.001 g, suspensi dengan air, viértala lentamente dalam 70 mL air yang dicampur dengan agitasi dan enjuague dengan 30 mL air yang bervariasi berulang kali Dalam wadah yang berisi endapan yang cukup dingin, jika dimasukkan ke dalam lokasi, suhunya akan tetap tinggi dan akan bertahan selama 2 menit hingga benar-benar transparan, jika suhu ruangan dinaikkan, maka volume cairan akan dipindahkan ke 100 ml dan diencerkan dengan air yang sudah dimasukkan. Solusi ini harus dipersiapkan secara terpisah setiap hari.

Tampon fosfat (pH=6,0): Berat 45,23 g asam fosfat dan 8,07 g asam sitrat, larutkan dalam air dan encerkan dalam 1000 mL. Setelah itu, kaliber dengan pH sedang.

Larutan asam klorida c(HCl)=0.1mol/L.

Instrumen dan Equipos:

Fotografi, air dengan suhu konstan 50 ℃-100 ℃, presisi ±0.1 ℃, tabung ensayo: 25 mm × 200 mm, volume matras, pipa otomatis, kroni.

Persiapan solusi enzimatis dalam penelitian ini:

Persiapan enzim cair: siapkan langsung dengan larutan tampon, dengan cara bahwa aktivitas enzim encer berada dalam kisaran 3,7-5,6 U/mL (ini memerlukan perkiraan aktivitas enzim untuk mengencerkan beberapa kali; jika aktivitas enzim tidak ada) jelas, jika Anda bisa mencobanya berulang kali).

Jadi:

1. Pipet 20,0 ml larutan almidón larut dan 5,0 ml larutan ke dalam tabung ensayo dan precalentar y equilibrar dalam bak air dengan suhu konstan 60 °C selama 5 menit.

2. Tuangkan 1,00 ml larutan enzim encer yang akan dianalisis, daftarkan segera pada waktu yang sama dengan kronik, aduk dengan baik dan bereaksi dengan presisi selama 5 menit.

3. Segera masukkan 1,00 mL larutan reaksi dengan satu pipa, masukkan ke dalam tabung ensayo yang diisi dengan 0,5 mL asam klorida 0,1 mol/L dan 5,00 mL larutan yodo encer dan aduk dengan baik.

4.Gunakan larutan 0,5 mL asam klorida 0,1 mol/L dan 5,00 mL larutan encer seperti reaktif pucat dan penyerapan cepat (A) dengan kubus 10 mm hingga garis bujur 660 nm. Setelah penyerapan, lihat Apéndice A (digunakan dalam standar QB-T 1803-93), dan dapatkan konsentrasi (C) dari solusi enzimatik.

Definisi aktivitas enzimatis:

1mL cairan enzim, cairkan almidón larut dalam 1 jam pada suhu 60℃, pH=6.0, merupakan unit aktivitas enzimatik, diekspresikan dalam U/mL.

perhitungan:

X=C×n, X: aktivitas enzimatik pada muestra, C: konsentrasi enzim pada prueba, n: faktor pengenceran pada muestra. Hasil yang diperoleh ditampilkan dalam jumlah masukan.

Toleransi hasil:

Kesalahan relatif dari percobaan paralel tidak melebihi 2%.