Giới thiệu phương pháp prueba de actividad enzimática de sencolado

nguyên tắc:

La α-amilasa puede cortar al azar el enlace glucósido α-1,4 en la cadena del almidón en dextrin de cadena corta, một pequeña cantidad de maltosa và glucosa con other kinh độ, de modo que la reacción específica del almidón al yodo es azul-negra. bạn sẽ mất dần dần và dần dần đạt được điều đó trên Marrón rojizo. Tốc độ giảm tốc độ của màu sắc được thiết lập tương tác với hoạt động enzimática, bởi vì que la hoạt động enzimática se podía tính toán trung gian hấp thụ giải pháp giải pháp phản ứng và điều kiện estándar.

Phản ứng và giải pháp:

Dung dịch yodo gốc: Pesar 22,0 g de yoduro de potasio và dissolverlo en aproximadamente 300 ml de agua, agregar 11,0 g de yodo, dissolverlo con agitación, luego transferirlo a un matraz volumétrico de 500 ml, enrasar con agua y almacenarlo en una botella marrón para su useo posterior (chuẩn bị một vài lần).

Dung dịch pha loãng yodo: Pesar 20,0 g de yoduro de potasio và dissolverlos en 300 mL de agua, agregar con precisión 2,00 mL de la solución original de yodo, transferir todo a un matraz aforado de 500 mL, enrasar con agua y almacenar en una botella marrón para su uso posterior (chuẩn bị một vez al mes).

Dung dịch almidón hòa tan 20 g/L: Pese 2,000 g de solución de almidón hòa tan (en base seca), với độ chính xác 0,001 g, haga una suspensión con agua, viértala lentamente en 70 mL de agua hirviendo con agitación y luego enjuague con 30 mL de agua varias veces En un vaso de precipitados pequeño que contiene almidón, se incorpora la loción, se calienta và se hierve durante 2 minutos hasta que esté completamente trong suốt, se enfría a tempatura ambiente, se transfiere a un matraz volumétrico de 100 ml y se pha loãng với agua hasta el enrase. Đây là giải pháp cần chuẩn bị cho một ngày tồi tệ.

Băng vệ sinh fosfato (pH=6,0): Pesar 45,23 g de fosfato ácido disódico và 8,07 g de ácido cítrico, chất hòa tan và pha loãng thành 1000 mL. Sau đó, tầm cỡ của nó có thể đạt được độ pH trung bình.

Dung dịch ác tính clorhídrico c(HCl)=0,1mol/L.

Dụng cụ và Thiết bị:

Espectrofotómetro, nhiệt độ không đổi 50 oC -100 oC, độ chính xác ±0,1 oC, ống đo nhiệt độ: 25 mm × 200 mm, thể tích matraz, pipeta automática, cronómetro.

Chuẩn bị giải pháp giải quyết vấn đề:

Chuẩn bị enzima líquida: chuẩn bị trực tiếp với dung dịch băng vệ sinh, cách thức hoạt động của enzima diluida esté en el rango de 3,7-5,6 U/mL (esto requiere la estimación de la actividad de la enzima para diluir a un multiple apropiado; si la actividad de la enzima no está clara, se puede probar lặp lại).

Ensayo:

1. Dùng pipet lấy 20,0 ml dung dịch almidón hòa tan và 5,0 ml dung dịch tampon trong ống đo và cân bằng trước và cân bằng trong nhiệt độ không đổi trong khoảng 60 °C trong 5 phút.

2. Tuổi 1,00 ml dung dịch enzima diluida mà bạn có thể phân tích, đăng ký ngay lập tức với thời gian với một cronómetro, hãy nhanh chóng và phản ứng với kết quả chính xác trong 5 phút.

3. Inmediatamente succione 1,00 mL dung dịch phản ứng với một pipet, caliéntelo trong một ống nghiệm để chuẩn bị trước với 0,5 mL de ácido clorhídrico 0,1 mol/L và 5,00 mL dung dịch yodo pha loãng và khuấy trộn.

4.Sử dụng một mezcla de 0,5 mL chất clorhídrico 0,1 mol/L và 5,00 mL dung dịch pha loãng như chất phản ứng trắng và tốc độ hấp thụ nhanh (A) với một khối 10 mm trên một chiều dài 660 nm. Tiếp tục hấp thụ, tham khảo Phụ lục A (búsqueda en el estándar QB-T 1803-93), và thu được tập trung (C) de la solución enzimática.

Định nghĩa hoạt động enzimática:

1mL enzima lỏng, licuefacción de almidón hòa tan trong 1 giờ đến 60oC, pH=6,0, là một đơn vị hoạt chất enzimática, biểu thị bằng U/mL.

tính toán:

X=C×n, X: la actividad enzimática de la muestra, C: la concentración de la enzima de prueba, n: yếu tố pha loãng muestra. Kết quả là bạn sẽ nhận được thông tin bằng số nhập.

Kết quả dung sai:

Lỗi tương đối của các thí nghiệm song song không quá 2%.