Introducción del Método de prueba de actividad enzimática de desencolado

اصل:

La α-amilasa puede cortar al azar el enlace glucósido α-1,4 en la cadena del almidón en dextrina de cadena corta, una pequeña cantidad de maltosa y glucosa con diferentes longitudes, de modo que la reacción almidoca especiófi ازل نگرا. el azul disminuyó gradualmente y gradualmente se convirtió en marón rojizo. La velocidad de desaparición de su color estaba relacionada con la actividad enzimática, por lo que la actividad enzimática se podía calcular midiendo la absorbancia de la solución después de la reacción en condiciones estándar.

Reactivos y Soluciones:

Solución de yodo اصل: Pesar 22,0 g de yoduro de potasio y disolverlo en aproximadamente 300 ml de agua, agregar 11,0 g de yodo, disolverlo con agitación, luego transferirlo a un matraz volumétrico enguralo5 una botella marón para su uso posterior (preparado una vez al mes).

Solución diluida de yodo: Pesar 20,0 g de yoduro de potasio y disolverlos en 300 mL de agua, agregar con precisión 2,00 ml de la solución original de yodo, transferir todo a un matraz aforado de en enraunace mL, 500 mL botella marón para su uso posterior (preparado una vez al mes).

Solución de almidón soluble de 20 g/L: Pese 2.000 g de solución de almidón soluble (en base seca), con una precisión de 0.001 g, haga una suspensión con agua, viértala lentamente en agióndoguay 700 luego enjuague con 30 mL de agua varias veces En un vaso de precipitados pequeño que contiene almidón, se incorpora la loción, se calienta y se hierve durante 2 minutos hasta que esté completamente ambulance transparente, se enfría transparent a ambientelumine 100 میلی لیتر y se diluye con agua hasta el enrase. Esta solución debe prepararse el mismo día.

تامپون فسفاتو (pH=6,0): پسار 45,23 گرم فسفاتو ácido disódico y 8,07 g de ácido cítrico, حل کننده در آگوا و دیلویر در 1000 میلی لیتر. Después de mezclar، caliber con un medidor de pH.

Solución de ácido Clorhídrico c(HCl)=0.1mol/L.

Instrumentos y Equipos:

طیف‌سنج، دمای ثابت 50 ℃-100 ℃، دقت ± 0.1 ℃، لوله بزرگ: 25 میلی‌متر × 200 میلی‌متر، حجم ماتراز، پیپتا خودکار، کرونومتر.

آماده سازی راه حل Enzimática و Ensayar:

آماده سازی enzima líquida: آماده کردن دستورات برای حل تامپون، de manera que la actividad de la enzima diluida esté en el rango de 3.7-5.6 U/mL (esto requiere la estimación de la actividad de la azima actividad de la enzima no está clara, se puede probar repetidamente).

انسایو:

1. Pipetear 20,0 ml de solución de almidón soluble y 5,0 ml de solucion tampón en un tubo de ensayo y precalentar y equilibrar en un baño de agua a temperatura ثابت در دمای 60 درجه سانتی گراد در مدت 5 دقیقه.

2. Agegue 1,00 ml de la solucion de enzima diluida que se va a analizar, registre inmediatamente el tiempo con un cronómetro, agite bien y reaccione con precision durante 5 minutos.

3. Inmediatamente succione 1,00 ml de la solución de reacción con una pipeta, caliéntelo en un tubo de ensayo precargado con 0,5 ml de ácido clorhídrico 0,1 mol/L y 5,00 ml de soluciódoagluiday.

4. Utilice una mezcla de 0,5 mL de ácido clorhídrico 0,1 mol/L y 5,00 mL de solución de yodo diluida como blanco de reactivo y mida rápidamente la absorbancia (A) con una cubeta de 10 de 6 mm a. Según la absorbancia، مشاوره el Apéndice A (búsqueda en el estándar QB-T 1803-93)، y obtenga la concentración (C) de la solución enzimática.

تعریف فعال سازی:

1 میلی لیتر از Enzima líquida، licuefacción de almidón محلول در 1 ساعت در دمای 60 درجه سانتیگراد، pH=6.0، یک واحد فعال از Enzimática، بیان شده در U/mL.

حسابی:

X=C×n، X: la actividad enzimática de la muestra، C: la concentración de la enzima de prueba، n: el factor de dilución de la muestra. Los resultados obtenidos se expresan en numeros enteros.

Tolerancia de resultados:

خطای نسبتاً نسبی در آزمایش های مشابه بدون سوپر ال 2%.