Language
Lượt xem: 41 Tác giả: Site Editor Thời gian xuất bản: 26/02/2021 Nguồn gốc: Địa điểm
Thuốc nhuộm Alexa Fluor là một loạt các chất tích điện âm và ưa nước thuốc nhuộm huỳnh quang với nhiều loại thuốc nhuộm và thường được sử dụng trong kỹ thuật kính hiển vi huỳnh quang. (Câu chuyện về thuốc nhuộm huỳnh quang: Dòng thuốc nhuộm Alexa Fluor được đặt theo tên của nhà phát minh Richard Paul Haugland theo tên con trai ông là Alex Haugland.)
Loạt nhãn huỳnh quang này bao gồm nhiều bước sóng. Ví dụ, Alexa Fluor488 với nhiều ứng dụng và bước sóng kích thích tối đa 493 nm có thể được kích thích bằng laser 488 nm tiêu chuẩn. Bước sóng phát xạ tối đa của Alexa Fluor488 là 519 nm. Chính vì những đặc điểm trên mà Alexa Fluor488 có những đặc tính tương tự FITC. Mặc dù Alexa Fluor488 là dẫn xuất fluorescein nhưng nó có độ ổn định và độ sáng huỳnh quang tốt hơn, đồng thời độ nhạy pH thấp hơn FITC. Tất cả thuốc nhuộm Alexa Fluor (ví dụ: Alexa Fluor546, Alexa Fluor633) đều là dạng sulfon hóa của các chất huỳnh quang cơ bản khác nhau. Ví dụ, fluorescein, coumarin, cyanine hoặc rhodamine có khối lượng mol nằm trong khoảng từ 410 đến 1400 g/mol.
Nó có nguồn gốc từ sắc tố lục lam và là nguồn gốc của tên của nó: Cy2, Cy3, Cy5 và Cy7. Tất cả các sắc tố màu lục lam nêu trên có thể được liên kết với axit nucleic, polypeptide và protein thông qua các nhóm phản ứng của chúng. Trong số đó, Cy3 và Cy5 là thuốc nhuộm có hệ số dập tắt cao. Nó đặc biệt thích hợp cho các thí nghiệm định vị peptide nhạy cảm trong tế bào và nó cũng là một trong những thuốc nhuộm dán nhãn peptide được sử dụng phổ biến trong Angtop Biotech. Về huỳnh quang như xyanua, Cy5 cũng đặc biệt nhạy cảm với môi trường điện tử xung quanh nó và tính năng này có thể được sử dụng để xác định enzyme. Sự thay đổi về hình dạng của protein gắn vào sẽ gây ra sự thay đổi tích cực hoặc tiêu cực trong phát xạ huỳnh quang. Ngoài ra, Cy3 và Cy5 cũng có thể được sử dụng cho các bài kiểm tra FRET.
Thuốc nhuộm Cyan tương đối cũ thuốc nhuộm huỳnh quang , nhưng nó là cơ sở để các thuốc nhuộm huỳnh quang khác cải thiện độ sáng, khả năng cản sáng, năng suất lượng tử, v.v.
Loại thuốc nhuộm này được sử dụng trong kỹ thuật kính hiển vi huỳnh quang, thường để nhuộm các khoang tế bào như lysosome, nội nhũ và các bào quan như ty thể. Cách phổ biến nhất để quan sát ty thể là sử dụng MitoTracker, một loại thuốc nhuộm thấm vào tế bào có chứa phần hoạt tính chloromethyl bị thiola hóa nhẹ. Do đó, nó có thể phản ứng với các nhóm rượu liu tự do của dư lượng cystein để đạt được liên kết cộng hóa trị với protein ma trận. Không giống như các chất nhuộm đặc hiệu của ty thể thông thường như Rhodamine 123 (Rh123) hoặc tetramethylrosamine, MitoTracker sẽ không bị rửa sạch sau khi điện thế màng bị phá vỡ bằng chất cố định.
Theo vết của ty thể, một số thuốc nhuộm có thể đánh dấu các ngăn có tính axit như lysosome. Loại thuốc nhuộm này được gọi là LysoTracker. Chúng bao gồm các nhóm bazơ yếu gắn với nhóm huỳnh quang và có khả năng xuyên qua màng. Có thể sự proton hóa của các gen cơ bản này có ái lực với các ngăn có tính axit. LysoTracker có nhiều màu sắc khác nhau để bạn lựa chọn. Khoang tương tự như lysosome là không bào ở Saccharomyces cerevisiae và các loại nấm khác, không gian giới hạn bằng màng này cũng là môi trường axit. Nếu bạn muốn quan sát các ngăn trên dưới kính hiển vi huỳnh quang, hãy sử dụng FM 4-64 hoặc FM 5-95, v.v.
Ngoài việc sử dụng thuốc nhuộm huỳnh quang phi protein cụ thể để dán nhãn các ngăn tế bào, vùng mục tiêu cũng có thể được nhuộm bằng các protein có ưu tiên cho các vị trí khác nhau trong tế bào. Những protein này có thể được liên kết với thuốc nhuộm huỳnh quang và có thể được quan sát qua kính hiển vi huỳnh quang.
Một ví dụ về việc sử dụng phương pháp này là: mầm lúa mì agglutinin (WGA) có thể liên kết đặc hiệu với axit sialic và nhóm N-acetylglucosamine trong màng sinh chất của tế bào, liên kết WGA với một thuốc nhuộm huỳnh quang , để chúng ta có thể quan sát được màng tế bào chất bên ngoài.
