Jenis pewarna fluoresen

1. Pewarna seri Alexa Fluor.

Pewarna Alexa Fluor merupakan rangkaian bermuatan negatif dan hidrofilik pewarna fluoresen dengan berbagai macam pewarna dan sering digunakan dalam teknik mikroskop fluoresensi. (Kisah pewarna fluoresen: Pewarna seri Alexa Fluor dinamai menurut nama penemu Richard Paul Haugland setelah putranya Alex Haugland.)

Rangkaian label fluoresen ini mencakup rentang panjang gelombang yang luas. Misalnya, Alexa Fluor488 dengan beragam aplikasi dan panjang gelombang eksitasi maksimal 493 nm dapat dieksitasi oleh laser standar 488 nm. Panjang gelombang emisi maksimum Alexa Fluor488 adalah 519 nm. Justru karena karakteristik di atas Alexa Fluor488 memiliki sifat yang mirip dengan FITC. Meskipun Alexa Fluor488 adalah turunan fluorescein, ia memiliki stabilitas dan kecerahan fluoresensi yang lebih baik, serta sensitivitas pH yang lebih rendah daripada FITC. Semua pewarna Alexa Fluor (misalnya, Alexa Fluor546, Alexa Fluor633) adalah bentuk tersulfonasi dari berbagai zat fluoresen dasar. Misalnya, fluorescein, kumarin, sianin, atau rhodamin memiliki massa molar berkisar antara 410 hingga 1400 g/mol.

2. Pewarna fluoresen seperti sianin relatif sedikit.

Ini berasal dari pigmen cyan dan merupakan asal usul namanya: Cy2, Cy3, Cy5 dan Cy7. Semua pigmen cyan yang disebutkan di atas dapat dihubungkan dengan asam nukleat, polipeptida dan protein melalui kelompok reaktifnya. Diantaranya, Cy3 dan Cy5 merupakan pewarna dengan koefisien kepunahan yang tinggi. Ini sangat cocok untuk eksperimen penentuan posisi peptida sensitif dalam sel, dan juga merupakan salah satu pewarna pelabelan peptida yang umum digunakan di Angtop Biotech. Mengenai fluoresensi seperti sianin, Cy5 juga sangat sensitif terhadap lingkungan elektronik sekitarnya, dan fitur ini dapat digunakan untuk penentuan enzim. Perubahan konformasi protein yang menempel akan menyebabkan perubahan emisi fluoresensi positif atau negatif. Selain itu, Cy3 dan Cy5 juga dapat digunakan untuk tes FRET.

Pewarna cyan merupakan pewarna yang relatif tua pewarna fluoresen , tetapi ini adalah dasar pewarna fluoresen lainnya untuk meningkatkan kecerahan, ketahanan cahaya, hasil kuantum, dll.

3. Pewarna khusus kompartemen dan organel

Jenis pewarna ini digunakan dalam teknik mikroskop fluoresensi, sering kali untuk menodai kompartemen sel seperti lisosom, endosom, dan organel seperti mitokondria. Cara paling umum untuk mengamati mitokondria adalah dengan menggunakan MitoTracker, yang merupakan pewarna permeabel sel yang mengandung bagian aktif klorometil yang sedikit tertiolasi. Oleh karena itu, ia dapat bereaksi dengan gugus liu alkohol bebas dari residu sistein untuk mencapai ikatan kovalen dengan protein matriks. Tidak seperti pewarna spesifik mitokondria konvensional seperti Rhodamin 123 (Rh123) atau tetramethylrosamine, MitoTracker tidak akan hilang setelah potensial membran diganggu dengan bahan fiksatif.

Berdasarkan noda mitokondria, beberapa pewarna dapat menandai kompartemen asam seperti lisosom. Jenis pewarna ini disebut LysoTracker. Mereka terdiri dari kelompok basa lemah yang melekat pada kelompok fluoresen dan menembus membran. Ada kemungkinan bahwa protonasi gen-gen dasar ini memiliki afinitas terhadap kompartemen asam. LysoTracker memiliki banyak warna berbeda untuk dipilih. Kompartemen yang mirip dengan lisosom adalah vakuola pada Saccharomyces cerevisiae dan jamur lainnya, dan ruang terbatas membran ini juga merupakan lingkungan asam. Jika Anda ingin mengamati kompartemen di atas di bawah mikroskop fluoresensi, gunakan FM 4-64 atau FM 5-95, dll.

Selain menggunakan pewarna fluoresen non-protein spesifik untuk memberi label pada kompartemen sel, area target juga dapat diwarnai dengan protein yang memiliki preferensi untuk lokasi berbeda di dalam sel. Protein ini dapat dihubungkan dengan pewarna fluoresen dan dapat diamati melalui mikroskop fluoresensi.

Contoh penggunaan metode ini adalah: aglutinin bibit gandum (WGA) dapat secara spesifik berikatan dengan asam sialat dan gugus N-asetilglukosamin di membran plasma sel, sehingga menggabungkan WGA dengan a pewarna fluoresen , sehingga kita dapat mengamati membran sitoplasma keluar.