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Vues : 38 Auteur : Éditeur du site Heure de publication : 2021-02-26 Origine : Site
Les colorants Alexa Fluor sont une série de colorants chargés négativement et hydrophiles colorants fluorescents avec une large gamme de colorants et sont souvent utilisés dans les techniques de microscopie à fluorescence. (Histoire des colorants fluorescents : les colorants de la série Alexa Fluor portent le nom de l'inventeur Richard Paul Haugland, d'après son fils Alex Haugland.)
Cette série d'étiquettes fluorescentes couvre une large gamme de longueurs d'onde. Par exemple, Alexa Fluor488, avec une large gamme d'applications et une longueur d'onde d'excitation maximale de 493 nm, peut être excitée par un laser standard de 488 nm. La longueur d'onde d'émission maximale d'Alexa Fluor488 est de 519 nm. C'est précisément en raison des caractéristiques ci-dessus qu'Alexa Fluor488 possède des propriétés similaires à celles du FITC. Bien qu'Alexa Fluor488 soit un dérivé de la fluorescéine, il présente une meilleure stabilité et une meilleure luminosité de fluorescence, ainsi qu'une sensibilité au pH plus faible que le FITC. Tous les colorants Alexa Fluor (par exemple Alexa Fluor546, Alexa Fluor633) sont des formes sulfonées de différentes substances fluorescentes basiques. Par exemple, la fluorescéine, la coumarine, la cyanine ou la rhodamine ont une masse molaire comprise entre 410 et 1 400 g/mol.
Il est dérivé du pigment cyan et est à l'origine de son nom : Cy2, Cy3, Cy5 et Cy7. Tous les pigments cyan mentionnés ci-dessus peuvent être liés aux acides nucléiques, aux polypeptides et aux protéines via leurs groupes réactifs. Parmi eux, Cy3 et Cy5 sont des colorants à coefficient d'extinction élevé. Il est particulièrement adapté aux expériences sensibles de positionnement des peptides dans les cellules, et c'est également l'un des colorants de marquage peptidique couramment utilisés chez Angtop Biotech. Concernant la fluorescence telle que la cyanine, Cy5 est également particulièrement sensible à son environnement électronique environnant, et cette caractéristique peut être utilisée pour la détermination des enzymes. Le changement conformationnel de la protéine attachée entraînera un changement positif ou négatif dans l’émission de fluorescence. De plus, Cy3 et Cy5 peuvent également être utilisés pour les tests FRET.
Le colorant cyan est un colorant relativement ancien colorant fluorescent , mais c'est la base d'autres colorants fluorescents pour améliorer la luminosité, la résistance à la lumière, le rendement quantique, etc.
Ce type de colorant est utilisé dans les techniques de microscopie à fluorescence, souvent pour colorer des compartiments cellulaires tels que les lysosomes, les endosomes et les organites tels que les mitochondries. La manière la plus courante d’observer les mitochondries consiste à utiliser MitoTracker, un colorant perméable aux cellules qui contient une partie active chlorométhyle légèrement thiolée. Pour cette raison, il peut réagir avec les groupes alcool liu libres des résidus cystéine pour obtenir une liaison covalente avec la protéine matricielle. Contrairement aux colorants classiques spécifiques aux mitochondries tels que la Rhodamine 123 (Rh123) ou la tétraméthylrosamine, MitoTracker ne sera pas lavé une fois le potentiel membranaire perturbé avec un fixateur.
Selon les colorations mitochondriales, certains colorants peuvent marquer des compartiments acides comme les lysosomes. Ce type de colorant est appelé LysoTracker. Ils sont composés de groupes de bases faibles attachés à un groupe fluorescent et pénètrent la membrane. Il est possible que la protonation de ces gènes basiques ait une affinité pour les compartiments acides. LysoTracker propose de nombreuses couleurs différentes parmi lesquelles choisir. Le compartiment similaire au lysosome est la vacuole chez Saccharomyces cerevisiae et d'autres champignons, et cet espace confiné membranaire est également un environnement acide. Si vous souhaitez observer les compartiments ci-dessus sous un microscope à fluorescence, utilisez FM 4-64 ou FM 5-95, etc.
En plus d’utiliser des colorants fluorescents non protéiques spécifiques pour marquer les compartiments cellulaires, la zone cible peut également être colorée avec des protéines qui ont une préférence pour différents emplacements de la cellule. Ces protéines peuvent être liées à des colorants fluorescents et peuvent être observées au microscope à fluorescence.
Un exemple d'utilisation de cette méthode est : l'agglutinine de germe de blé (WGA) peut se lier spécifiquement aux groupes acide sialique et N-acétylglucosamine dans la membrane plasmique de la cellule, couplant la WGA à un colorant fluorescent , afin que nous puissions observer la membrane cytoplasmique.
