Tipos de tintes fluorescentes

1. Tintes serie Alexa Fluor.

Los tintes Alexa Fluor son una serie de tintes hidrofílicos y con carga negativa. Tintes fluorescentes con una amplia gama de tintes y se utilizan a menudo en técnicas de microscopía de fluorescencia. (Historia del tinte fluorescente: los tintes de la serie Alexa Fluor llevan el nombre del inventor Richard Paul Haugland en honor a su hijo Alex Haugland).

Esta serie de etiquetas fluorescentes cubre una amplia gama de longitudes de onda. Por ejemplo, Alexa Fluor488 con una amplia gama de aplicaciones y una longitud de onda de excitación máxima de 493 nm puede excitarse con un láser estándar de 488 nm. La longitud de onda de emisión máxima de Alexa Fluor488 es de 519 nm. Es precisamente por las características anteriores que Alexa Fluor488 tiene propiedades similares a FITC. Aunque Alexa Fluor488 es un derivado de la fluoresceína, tiene mejor estabilidad y brillo de fluorescencia, y menor sensibilidad al pH que FITC. Todos los colorantes Alexa Fluor (por ejemplo, Alexa Fluor546, Alexa Fluor633) son formas sulfonadas de diferentes sustancias fluorescentes básicas. Por ejemplo, la fluoresceína, la cumarina, la cianina o la rodamina tienen una masa molar en el intervalo de 410 a 1400 g/mol.

2. Hay relativamente pocos tintes fluorescentes como la cianina.

Se deriva del pigmento cian y es el origen de su nombre: Cy2, Cy3, Cy5 y Cy7. Todos los pigmentos cian mencionados anteriormente pueden unirse a ácidos nucleicos, polipéptidos y proteínas a través de sus grupos reactivos. Entre ellos, Cy3 y Cy5 son tintes con alto coeficiente de extinción. Es especialmente adecuado para experimentos de posicionamiento de péptidos sensibles en células y también es uno de los colorantes de etiquetado de péptidos comúnmente utilizados en Angtop Biotech. En cuanto a fluorescencia como la cianina, Cy5 también es particularmente sensible al entorno electrónico que lo rodea, y esta característica se puede utilizar para la determinación de enzimas. El cambio conformacional de la proteína unida provocará un cambio positivo o negativo en la emisión de fluorescencia. Además, Cy3 y Cy5 también se pueden utilizar para pruebas FRET.

El tinte cian es relativamente antiguo. tinte fluorescente , pero es la base de otros tintes fluorescentes para mejorar el brillo, la resistencia a la luz, el rendimiento cuántico, etc.

3. Tintes específicos de compartimentos y orgánulos.

Este tipo de tinte se utiliza en técnicas de microscopía de fluorescencia, a menudo para teñir compartimentos celulares como lisosomas, endosomas y orgánulos como las mitocondrias. La forma más común de observar las mitocondrias es utilizar MitoTracker, que es un tinte permeable a las células que contiene una parte activa de clorometilo ligeramente tiolada. Debido a esto, puede reaccionar con los grupos alcohol liu libres de los residuos de cisteína para lograr un enlace covalente con la proteína de la matriz. A diferencia de los tintes mitocondriales específicos convencionales, como la rodamina 123 (Rh123) o la tetrametilrosamina, MitoTracker no se eliminará con lavado después de que se altere el potencial de membrana con un fijador.

Según las tinciones mitocondriales, algunos tintes pueden marcar compartimentos ácidos como los lisosomas. Este tipo de tinte se llama LysoTracker. Están compuestos por grupos de bases débiles unidos a un grupo fluorescente y penetran la membrana. Es posible que la protonación de estos genes básicos tenga afinidad por los compartimentos ácidos. LysoTracker tiene muchos colores diferentes para elegir. El compartimento similar al lisosoma es la vacuola en Saccharomyces cerevisiae y otros hongos, y este espacio confinado en la membrana también es un ambiente ácido. Si desea observar los compartimentos anteriores bajo un microscopio de fluorescencia, utilice FM 4-64 o FM 5-95, etc.

Además de utilizar tintes fluorescentes no proteicos específicos para marcar los compartimentos celulares, el área objetivo también se puede teñir con proteínas que tienen preferencia por diferentes ubicaciones en la célula. Estas proteínas se pueden vincular a tintes fluorescentes y se pueden observar a través de un microscopio de fluorescencia.

Un ejemplo del uso de este método es: la aglutinina del germen de trigo (WGA) puede unirse específicamente a los grupos de ácido siálico y N-acetilglucosamina en la membrana plasmática de la célula, acoplando la WGA a un tinte fluorescente , para que podamos observar la membrana del citoplasma.