Виды флуоресцентных красителей

1. Красители серии Alexa Fluor.

Красители Alexa Fluor представляют собой серию отрицательно заряженных и гидрофильных красителей. флуоресцентные красители с широким спектром красителей и часто используются в методах флуоресцентной микроскопии. (История флуоресцентных красителей: красители серии Alexa Fluor названы в честь изобретателя Ричарда Пола Хогланда в честь его сына Алекса Хогланда.)

Эта серия флуоресцентных этикеток охватывает широкий диапазон длин волн. Например, Alexa Fluor488 с широким спектром применения и максимальной длиной волны возбуждения 493 нм может возбуждаться стандартным лазером с длиной волны 488 нм. Максимальная длина волны излучения Alexa Fluor488 составляет 519 нм. Именно из-за вышеперечисленных характеристик Alexa Fluor488 имеет свойства, схожие с FITC. Хотя Alexa Fluor488 является производным флуоресцеина, он имеет лучшую стабильность и яркость флуоресценции, а также более низкую чувствительность к pH, чем FITC. Все красители Alexa Fluor (например, Alexa Fluor546, Alexa Fluor633) представляют собой сульфированные формы различных основных флуоресцентных веществ. Например, флуоресцеин, кумарин, цианин или родамин имеют молярную массу в диапазоне от 410 до 1400 г/моль.

2. Флуоресцентных красителей, таких как цианин, относительно немного.

Он получен из голубого пигмента, отсюда и его название: Cy2, Cy3, Cy5 и Cy7. Все вышеупомянутые голубые пигменты могут быть связаны с нуклеиновыми кислотами, полипептидами и белками через свои реакционноспособные группы. Среди них Cy3 и Cy5 являются красителями с высоким коэффициентом экстинкции. Он особенно подходит для чувствительных экспериментов по позиционированию пептидов в клетках, а также является одним из широко используемых красителей для мечения пептидов в Angtop Biotech. Что касается флуоресценции, такой как цианин, Cy5 также особенно чувствителен к окружающему его электронному окружению, и эту особенность можно использовать для определения ферментов. Конформационное изменение присоединенного белка вызовет положительное или отрицательное изменение эмиссии флуоресценции. Кроме того, Cy3 и Cy5 также можно использовать для тестов FRET.

Голубой краситель – относительно старый флуоресцентный краситель , но он является основой для других флуоресцентных красителей для улучшения яркости, светостойкости, квантового выхода и т. д.

3. Красители, специфичные для отсеков и органелл.

Этот тип красителя используется в методах флуоресцентной микроскопии, часто для окрашивания клеточных компартментов, таких как лизосомы, эндосомы и органеллы, такие как митохондрии. Самый распространенный способ наблюдения за митохондриями — использование MitoTracker, проницаемого для клеток красителя, содержащего слабо тиолированную хлорметильную активную часть. Благодаря этому он может реагировать со свободными спиртовыми группами остатков цистеина для достижения ковалентной связи с матричным белком. В отличие от обычных красителей, специфичных для митохондрий, таких как родамин 123 (Rh123) или тетраметилрозамин, MitoTracker не смывается после нарушения мембранного потенциала фиксатором.

Согласно окраске митохондрий, некоторые красители могут маркировать кислые компартменты, такие как лизосомы. Этот тип красителя называется LysoTracker. Они состоят из групп слабых оснований, присоединенных к флуоресцентной группе, и проникают через мембрану. Возможно, что протонирование этих основных генов имеет сродство к кислым компартментам. LysoTracker имеет множество различных цветов на выбор. Отделение, подобное лизосоме, представляет собой вакуоль у Saccharomyces cerevisiae и других грибов, и это ограниченное мембраной пространство также представляет собой кислую среду. Если вы хотите наблюдать указанные выше отсеки под флуоресцентным микроскопом, используйте FM 4-64 или FM 5-95 и т. д.

Помимо использования специфических небелковых флуоресцентных красителей для маркировки клеточных компартментов, целевую область также можно окрашивать белками, которые предпочитают разные места в клетке. Эти белки можно связать с флуоресцентными красителями и наблюдать с помощью флуоресцентного микроскопа.

Примером использования этого метода является: агглютинин зародышей пшеницы (АЗП) может специфически связываться с группами сиаловой кислоты и N-ацетилглюкозамина в плазматической мембране клетки, связывая АПГ с флуоресцентный краситель , так что мы можем наблюдать цитоплазматическую мембрану.