Arten von Fluoreszenzfarbstoffen

1. Farbstoffe der Alexa Fluor-Serie.

Alexa Fluor-Farbstoffe sind eine Reihe negativ geladener und hydrophiler Farbstoffe Fluoreszenzfarbstoffe mit einer breiten Palette von Farbstoffen und werden häufig in Fluoreszenzmikroskopietechniken verwendet. (Fluoreszierende Farbstoffgeschichte: Die Farbstoffe der Alexa Fluor-Serie sind nach dem Erfinder Richard Paul Haugland und seinem Sohn Alex Haugland benannt.)

Diese Serie fluoreszierender Etiketten deckt einen breiten Wellenlängenbereich ab. Beispielsweise kann Alexa Fluor488 mit einem breiten Anwendungsspektrum und einer maximalen Anregungswellenlänge von 493 nm mit einem standardmäßigen 488-nm-Laser angeregt werden. Die maximale Emissionswellenlänge von Alexa Fluor488 beträgt 519 nm. Gerade aufgrund der oben genannten Eigenschaften weist Alexa Fluor488 ähnliche Eigenschaften wie FITC auf. Obwohl Alexa Fluor488 ein Fluorescein-Derivat ist, weist es eine bessere Stabilität und Fluoreszenzhelligkeit sowie eine geringere pH-Empfindlichkeit als FITC auf. Alle Alexa Fluor-Farbstoffe (zum Beispiel Alexa Fluor546, Alexa Fluor633) sind sulfonierte Formen verschiedener grundlegender fluoreszierender Substanzen. Beispielsweise haben Fluorescein, Cumarin, Cyanin oder Rhodamin eine Molmasse im Bereich von 410 bis 1400 g/mol.

2. Es gibt relativ wenige Fluoreszenzfarbstoffe wie Cyanin.

Es leitet sich vom Cyan-Pigment ab und ist der Ursprung seines Namens: Cy2, Cy3, Cy5 und Cy7. Alle oben genannten Cyanpigmente können über ihre reaktiven Gruppen an Nukleinsäuren, Polypeptide und Proteine ​​gebunden werden. Unter ihnen sind Cy3 und Cy5 Farbstoffe mit hohem Extinktionskoeffizienten. Es eignet sich besonders für empfindliche Peptidpositionierungsexperimente in Zellen und ist außerdem einer der am häufigsten verwendeten Peptidmarkierungsfarbstoffe bei Angtop Biotech. In Bezug auf Fluoreszenz wie Cyanin reagiert Cy5 auch besonders empfindlich auf die umgebende elektronische Umgebung, und diese Eigenschaft kann zur Enzymbestimmung genutzt werden. Die Konformationsänderung des gebundenen Proteins führt zu einer positiven oder negativen Änderung der Fluoreszenzemission. Darüber hinaus können Cy3 und Cy5 auch für FRET-Tests verwendet werden.

Der Farbstoff Cyan ist ein relativ alter Farbstoff Fluoreszenzfarbstoff , aber er ist die Grundlage für andere Fluoreszenzfarbstoffe zur Verbesserung der Helligkeit, Lichtbeständigkeit, Quantenausbeute usw.

3. Kompartiment- und organellenspezifische Farbstoffe

Diese Art von Farbstoff wird in Fluoreszenzmikroskopietechniken verwendet, häufig zum Färben von Zellkompartimenten wie Lysosomen, Endosomen und Organellen wie Mitochondrien. Die gebräuchlichste Methode zur Beobachtung von Mitochondrien ist die Verwendung von MitoTracker, einem zelldurchlässigen Farbstoff, der einen leicht thiolierten aktiven Chlormethyl-Teil enthält. Aus diesem Grund kann es mit den freien Liu-Alkoholgruppen von Cysteinresten reagieren, um eine kovalente Bindung mit dem Matrixprotein zu erreichen. Im Gegensatz zu herkömmlichen mitochondrialen spezifischen Färbemitteln wie Rhodamin 123 (Rh123) oder Tetramethylrosamin wird MitoTracker nicht abgewaschen, nachdem das Membranpotential mit einem Fixiermittel gestört wurde.

Laut mitochondrialer Färbung können einige Farbstoffe saure Kompartimente wie Lysosomen markieren. Diese Art von Farbstoff wird LysoTracker genannt. Sie bestehen aus schwachen Basengruppen, die an eine fluoreszierende Gruppe gebunden sind, und dringen in die Membran ein. Es ist möglich, dass die Protonierung dieser basischen Gene eine Affinität zu sauren Kompartimenten aufweist. LysoTracker bietet viele verschiedene Farben zur Auswahl. Das dem Lysosom ähnliche Kompartiment ist die Vakuole bei Saccharomyces cerevisiae und anderen Pilzen, und dieser von der Membran begrenzte Raum ist auch eine saure Umgebung. Wenn Sie die oben genannten Kompartimente unter einem Fluoreszenzmikroskop beobachten möchten, verwenden Sie FM 4-64 oder FM 5-95 usw.

Neben der Verwendung spezifischer Nicht-Protein-Fluoreszenzfarbstoffe zur Markierung von Zellkompartimenten kann der Zielbereich auch mit Proteinen angefärbt werden, die eine Vorliebe für unterschiedliche Orte in der Zelle haben. Diese Proteine ​​können mit Fluoreszenzfarbstoffen verknüpft und durch ein Fluoreszenzmikroskop beobachtet werden.

Ein Beispiel für die Verwendung dieser Methode ist: Weizenkeimagglutinin (WGA) kann spezifisch an Sialinsäure- und N-Acetylglucosamingruppen in der Plasmamembran der Zelle binden und WGA an a koppeln Fluoreszenzfarbstoff , damit wir das Zytoplasma aus der Membran heraus beobachten können.