أنواع الأصباغ الفلورية

1. أصباغ سلسلة Alexa Fluor.

أصباغ Alexa Fluor هي سلسلة من الأصباغ السالبة الشحنة والمحبة للماء الأصباغ الفلورية مع مجموعة واسعة من الأصباغ وغالبا ما تستخدم في تقنيات الفحص المجهري الفلوري. (قصة صبغة الفلورسنت: تم تسمية أصباغ سلسلة Alexa Fluor على اسم المخترع ريتشارد بول هوغلاند على اسم ابنه أليكس هوغلاند.)

تغطي هذه السلسلة من ملصقات الفلورسنت نطاقًا واسعًا من الأطوال الموجية. على سبيل المثال، يمكن إثارة Alexa Fluor488 مع مجموعة واسعة من التطبيقات وطول موجة أقصى للإثارة يبلغ 493 نانومتر بواسطة ليزر قياسي يبلغ طوله 488 نانومتر. الحد الأقصى لطول موجة انبعاث Alexa Fluor488 هو 519 نانومتر. بسبب الخصائص المذكورة أعلاه على وجه التحديد، تتمتع Alexa Fluor488 بخصائص مشابهة لـ FITC. على الرغم من أن Alexa Fluor488 هو أحد مشتقات الفلورسين، إلا أنه يتمتع بثبات أفضل وسطوع مضان، وحساسية أقل لدرجة الحموضة من FITC. جميع أصباغ Alexa Fluor (على سبيل المثال، Alexa Fluor546، Alexa Fluor633) هي أشكال مسلفنة من مواد الفلورسنت الأساسية المختلفة. على سبيل المثال، الفلورسين، الكومارين، السيانين أو الرودامين لها كتلة مولية في حدود 410 إلى 1400 جم / مول.

2. هناك عدد قليل نسبيا من الأصباغ الفلورية مثل السيانين.

وهو مشتق من الصباغ السماوي وهو أصل اسمه: Cy2 وCy3 وCy5 وCy7. يمكن ربط جميع الأصباغ السماوية المذكورة أعلاه بالأحماض النووية والبيبتيدات والبروتينات من خلال مجموعاتها التفاعلية. من بينها، Cy3 وCy5 هي الأصباغ ذات معامل الانقراض العالي. إنها مناسبة بشكل خاص لتجارب تحديد موضع الببتيد الحساسة في الخلايا، وهي أيضًا واحدة من أصباغ وضع العلامات الببتيدية شائعة الاستخدام في Angtop Biotech. فيما يتعلق بالفلورة مثل السيانين، فإن Cy5 أيضًا حساس بشكل خاص للبيئة الإلكترونية المحيطة به، ويمكن استخدام هذه الميزة لتحديد الإنزيم. سيؤدي التغيير المطابق للبروتين المرفق إلى حدوث تغيير إيجابي أو سلبي في انبعاث الفلورسنت. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أيضًا استخدام Cy3 وCy5 في اختبارات FRET.

الصبغة السماوية قديمة نسبيًا صبغة الفلورسنت ، ولكنها الأساس للأصباغ الفلورية الأخرى لتحسين السطوع ومقاومة الضوء والإنتاج الكمي وما إلى ذلك.

3. الأصباغ الخاصة بالمقصورة والعضية

يُستخدم هذا النوع من الصبغة في تقنيات الفحص المجهري الفلوري، غالبًا لصبغ أجزاء الخلايا مثل الجسيمات الحالة، والإندوسومات، والعضيات مثل الميتوكوندريا. الطريقة الأكثر شيوعًا لمراقبة الميتوكوندريا هي استخدام MitoTracker، وهي صبغة نفاذية للخلية تحتوي على جزء نشط من كلورو ميثيل ثيولات. وبسبب هذا، يمكن أن يتفاعل مع مجموعات كحول الليو الحرة من بقايا السيستين لتحقيق رابطة تساهمية مع بروتين المصفوفة. على عكس البقع التقليدية الخاصة بالميتوكوندريا مثل رودامين 123 (Rh123) أو رباعي ميثيل روزامين، لن يتم غسل MitoTracker بعد تعطيل إمكانات الغشاء باستخدام مادة مثبتة.

وفقا لبقع الميتوكوندريا، يمكن لبعض الأصباغ تحديد الأجزاء الحمضية مثل الليزوزومات. ويسمى هذا النوع من الصبغة LysoTracker. وهي مكونة من مجموعات أساسية ضعيفة مرتبطة بمجموعة الفلورسنت وهي مخترقة للأغشية. من الممكن أن يكون لبروتونات هذه الجينات الأساسية صلة بالأجزاء الحمضية. لدى LysoTracker العديد من الألوان المختلفة للاختيار من بينها. الحيز المشابه للليزوسوم هو الفجوة الموجودة في Saccharomyces cerevisiae والفطريات الأخرى، وهذا الغشاء المحصور هو أيضًا بيئة حمضية. إذا كنت تريد مراقبة الأجزاء المذكورة أعلاه تحت المجهر الفلوري، فاستخدم FM 4-64 أو FM 5-95، وما إلى ذلك.

بالإضافة إلى استخدام أصباغ الفلورسنت غير البروتينية المحددة لتسمية مقصورات الخلايا، يمكن أيضًا تلوين المنطقة المستهدفة بالبروتينات التي تفضل مواقع مختلفة في الخلية. يمكن ربط هذه البروتينات بأصباغ الفلورسنت ويمكن ملاحظتها من خلال المجهر الفلوري.

مثال على استخدام هذه الطريقة: يمكن أن ترتبط راصات جنين القمح (WGA) بشكل خاص بحمض السياليك ومجموعات N-acetylglucosamine في الغشاء البلازمي للخلية، مما يؤدي إلى اقتران WGA بـ صبغة الفلورسنت ، حتى نتمكن من مراقبة غشاء السيتوبلازم.