Floresan boya türleri

1. Alexa Fluor serisi boyalar.

Alexa Fluor boyaları bir dizi negatif yüklü ve hidrofiliktir. Floresan boyalar geniş bir boya yelpazesine sahiptir ve sıklıkla floresan mikroskopi tekniklerinde kullanılır. (Floresan boya hikayesi: Alexa Fluor serisi boyalar, adını mucit Richard Paul Haugland'ın oğlu Alex Haugland'dan almıştır.)

Bu floresan etiket serisi geniş bir dalga boyu aralığını kapsar. Örneğin, geniş bir uygulama yelpazesine ve maksimum 493 nm uyarma dalga boyuna sahip Alexa Fluor488, standart bir 488 nm lazer tarafından uyarılabilir. Alexa Fluor488'in maksimum emisyon dalga boyu 519 nm'dir. Alexa Fluor488'in FITC'ye benzer özelliklere sahip olması tam olarak yukarıdaki özelliklerden kaynaklanmaktadır. Alexa Fluor488 bir floresan türevi olmasına rağmen FITC'den daha iyi stabiliteye ve floresans parlaklığına ve daha düşük pH duyarlılığına sahiptir. Tüm Alexa Fluor boyaları (örneğin, Alexa Fluor546, Alexa Fluor633) farklı temel floresan maddelerin sülfonlanmış formlarıdır. Örneğin floresein, kumarin, siyanin veya rodaminin molar kütlesi 410 ila 1400 g/mol aralığındadır.

2. Siyanin gibi nispeten az sayıda floresan boya vardır.

Camgöbeği pigmentinden türetilir ve adının kökenidir: Cy2, Cy3, Cy5 ve Cy7. Yukarıda bahsedilen camgöbeği pigmentlerinin tümü, reaktif grupları aracılığıyla nükleik asitlere, polipeptitlere ve proteinlere bağlanabilir. Bunlar arasında Cy3 ve Cy5 yüksek sönme katsayısına sahip boyalardır. Özellikle hücrelerdeki hassas peptit konumlandırma deneyleri için uygundur ve aynı zamanda Angtop Biotech'te yaygın olarak kullanılan peptit etiketleme boyalarından biridir. Siyanin gibi floresans açısından Cy5 ayrıca kendisini çevreleyen elektronik ortama karşı özellikle duyarlıdır ve bu özellik enzim tespiti için kullanılabilir. Bağlı proteinin konformasyonel değişimi, floresans emisyonunda pozitif veya negatif bir değişikliğe neden olacaktır. Ayrıca FRET testleri için Cy3 ve Cy5 de kullanılabilir.

Camgöbeği boyası nispeten eski bir boyadır. Floresan boya , ancak diğer floresan boyaların parlaklık, ışık direnci, kuantum verimi vb. özelliklerini geliştirmesinin temelini oluşturur.

3. Bölme ve organele özgü boyalar

Bu tip boya, floresan mikroskopi tekniklerinde sıklıkla lizozomlar, endozomlar gibi hücre bölmelerini ve mitokondri gibi organelleri boyamak için kullanılır. Mitokondriyi gözlemlemenin en yaygın yolu, hafif tiyollenmiş klorometil aktif kısmı içeren hücre geçirgen bir boya olan MitoTracker'ı kullanmaktır. Bu nedenle, matris proteini ile kovalent bağlanmayı sağlamak için sistein kalıntılarının serbest liu alkol grupları ile reaksiyona girebilir. Rhodamine 123 (Rh123) veya tetrametilrosamin gibi geleneksel mitokondriyal spesifik lekelerin aksine, MitoTracker, membran potansiyeli bir fiksatifle bozulduktan sonra yıkanmayacaktır.

Mitokondriyal lekelere göre bazı boyalar, lizozomlar gibi asidik bölmeleri işaretleyebilir. Bu tip boyaya LysoTracker adı verilir. Floresan bir gruba bağlı zayıf baz gruplarından oluşurlar ve membrana nüfuz ederler. Bu temel genlerin protonasyonunun asidik bölmelere afinitesi olması mümkündür. LysoTracker'ın seçebileceğiniz birçok farklı rengi vardır. Lizozomun benzeri bölme, Saccharomyces cerevisiae ve diğer mantarlardaki kofuldur ve bu zarla sınırlı alan aynı zamanda asidik bir ortamdır. Yukarıdaki bölmeleri floresans mikroskobu altında gözlemlemek istiyorsanız FM 4-64 veya FM 5-95 vb. kullanın.

Hücre bölmelerini etiketlemek için spesifik protein olmayan floresan boyaların kullanılmasına ek olarak, hedef alan aynı zamanda hücredeki farklı konumları tercih eden proteinlerle de boyanabilir. Bu proteinler floresan boyalara bağlanabilir ve bir floresan mikroskobu aracılığıyla gözlemlenebilir.

Bu yöntemin kullanılmasına bir örnek: buğday tohumu aglütinin (WGA), hücrenin plazma zarındaki sialik asit ve N-asetilglukosamin gruplarına spesifik olarak bağlanarak WGA'yı bir Floresan boya , böylece sitoplazma zarının çıkışını gözlemleyebiliriz.