Tipos de corantes fluorescentes

1. Corantes da série Alexa Fluor.

Os corantes Alexa Fluor são uma série de corantes com carga negativa e hidrofílicos corantes fluorescentes com uma ampla gama de corantes e são frequentemente usados ​​em técnicas de microscopia de fluorescência. (História da tintura fluorescente: as tinturas da série Alexa Fluor têm o nome do inventor Richard Paul Haugland em homenagem a seu filho Alex Haugland.)

Esta série de etiquetas fluorescentes cobre uma ampla gama de comprimentos de onda. Por exemplo, Alexa Fluor488 com uma ampla gama de aplicações e um comprimento de onda máximo de excitação de 493 nm pode ser excitado por um laser padrão de 488 nm. O comprimento de onda máximo de emissão do Alexa Fluor488 é 519 nm. É justamente pelas características acima que Alexa Fluor488 possui propriedades semelhantes às do FITC. Embora Alexa Fluor488 seja um derivado da fluoresceína, ele possui melhor estabilidade e brilho de fluorescência e menor sensibilidade ao pH do que o FITC. Todos os corantes Alexa Fluor (por exemplo, Alexa Fluor546, Alexa Fluor633) são formas sulfonadas de diferentes substâncias fluorescentes básicas. Por exemplo, a fluoresceína, a cumarina, a cianina ou a rodamina têm uma massa molar na gama de 410 a 1400 g/mol.

2. Existem relativamente poucos corantes fluorescentes, como o cianino.

É derivado do pigmento ciano e é a origem do seu nome: Cy2, Cy3, Cy5 e Cy7. Todos os pigmentos ciano mencionados acima podem ser ligados a ácidos nucleicos, polipeptídeos e proteínas através dos seus grupos reativos. Dentre eles, Cy3 e Cy5 são corantes com alto coeficiente de extinção. É especialmente adequado para experimentos sensíveis de posicionamento de peptídeos em células e também é um dos corantes de marcação de peptídeos comumente usados ​​na Angtop Biotech. Em relação à fluorescência como a cianina, o Cy5 também é particularmente sensível ao ambiente eletrônico circundante, e esse recurso pode ser usado para determinação enzimática. A mudança conformacional da proteína ligada causará uma mudança positiva ou negativa na emissão de fluorescência. Além disso, Cy3 e Cy5 também podem ser usados ​​para testes FRET.

O corante ciano é relativamente antigo corante fluorescente , mas é a base para outros corantes fluorescentes melhorarem o brilho, a resistência à luz, o rendimento quântico, etc.

3. Corantes específicos para compartimentos e organelas

Este tipo de corante é usado em técnicas de microscopia de fluorescência, muitas vezes para corar compartimentos celulares, como lisossomos, endossomos e organelas, como mitocôndrias. A maneira mais comum de observar mitocôndrias é usar o MitoTracker, que é um corante permeável às células que contém uma parte ativa de clorometil levemente tiolada. Por causa disso, ele pode reagir com os grupos li-álcool livres dos resíduos de cisteína para obter ligação covalente com a proteína da matriz. Ao contrário dos corantes específicos mitocondriais convencionais, como Rodamina 123 (Rh123) ou tetrametilrosamina, o MitoTracker não será removido após o potencial da membrana ser interrompido com um fixador.

De acordo com manchas mitocondriais, alguns corantes podem marcar compartimentos ácidos, como os lisossomos. Este tipo de corante é denominado LysoTracker. Eles são compostos de grupos de bases fracas ligados a um grupo fluorescente e penetram na membrana. É possível que a protonação destes genes básicos tenha afinidade por compartimentos ácidos. LysoTracker tem muitas cores diferentes para você escolher. O compartimento semelhante ao lisossoma é o vacúolo em Saccharomyces cerevisiae e outros fungos, e este espaço confinado à membrana também é um ambiente ácido. Se quiser observar os compartimentos acima sob um microscópio de fluorescência, use FM 4-64 ou FM 5-95, etc.

Além de usar corantes fluorescentes não proteicos específicos para marcar compartimentos celulares, a área alvo também pode ser corada com proteínas que têm preferência por diferentes locais na célula. Estas proteínas podem ser ligadas a corantes fluorescentes e podem ser observadas através de um microscópio de fluorescência.

Um exemplo do uso deste método é: a aglutinina de gérmen de trigo (WGA) pode se ligar especificamente ao ácido siálico e aos grupos N-acetilglucosamina na membrana plasmática da célula, acoplando o WGA a um corante fluorescente , para que possamos observar a membrana do citoplasma.