انواع رنگهای فلورسنت

1. رنگ های سری الکسا فلور.

رنگ های الکسا فلور یک سری رنگ های دارای بار منفی و آب دوست هستند رنگ های فلورسنت با طیف گسترده ای از رنگ ها و اغلب در تکنیک های میکروسکوپ فلورسانس استفاده می شود. (داستان رنگ فلورسنت: رنگ های سری الکسا فلور به نام مخترع ریچارد پل هاگلند به نام پسرش الکس هاگلند نامگذاری شده اند.)

این سری از برچسب های فلورسنت طیف وسیعی از طول موج ها را پوشش می دهد. به عنوان مثال، Alexa Fluor488 با طیف گسترده ای از کاربردها و حداکثر طول موج تحریک 493 نانومتر می تواند توسط لیزر استاندارد 488 نانومتر برانگیخته شود. حداکثر طول موج انتشار Alexa Fluor488 519 نانومتر است. دقیقاً به دلیل ویژگی های فوق است که Alexa Fluor488 دارای ویژگی های مشابه FITC است. اگرچه Alexa Fluor488 یک مشتق فلورسین است، اما پایداری و روشنایی فلورسانس بهتر و حساسیت pH کمتری نسبت به FITC دارد. تمام رنگ های الکسا فلور (به عنوان مثال Alexa Fluor546، Alexa Fluor633) اشکال سولفونه شده از مواد مختلف فلورسنت پایه هستند. به عنوان مثال، فلورسئین، کومارین، سیانین یا رودامین دارای جرم مولی در محدوده 410 تا 1400 گرم در مول هستند.

2. رنگ های فلورسنت نسبتا کمی مانند سیانین وجود دارد.

از رنگدانه فیروزه ای مشتق شده است و منشاء نام آن است: Cy2، Cy3، Cy5 و Cy7. تمام رنگدانه‌های فیروزه‌ای فوق‌الذکر می‌توانند از طریق گروه‌های واکنشی خود به اسیدهای نوکلئیک، پلی پپتیدها و پروتئین‌ها مرتبط شوند. در این میان Cy3 و Cy5 رنگ هایی با ضریب انقراض بالا هستند. این به ویژه برای آزمایش های حساس موقعیت پپتید در سلول ها مناسب است، و همچنین یکی از رنگ های برچسب گذاری پپتید رایج در Angtop Biotech است. با توجه به فلورسانس مانند سیانین، Cy5 نیز به طور ویژه به محیط الکترونیکی اطراف خود حساس است و از این ویژگی می توان برای تعیین آنزیم استفاده کرد. تغییر ساختاری پروتئین متصل باعث تغییر مثبت یا منفی در انتشار فلورسانس می شود. علاوه بر این، Cy3 و Cy5 را نیز می توان برای تست FRET استفاده کرد.

رنگ فیروزه ای نسبتا قدیمی است رنگ فلورسنت ، اما پایه ای برای سایر رنگ های فلورسنت برای بهبود روشنایی، مقاومت در برابر نور، بازده کوانتومی و غیره است.

3. رنگهای مخصوص محفظه و اندامک

این نوع رنگ در تکنیک‌های میکروسکوپ فلورسانس، اغلب برای رنگ‌آمیزی بخش‌های سلولی مانند لیزوزوم‌ها، اندوزوم‌ها و اندامک‌هایی مانند میتوکندری استفاده می‌شود. رایج‌ترین راه برای مشاهده میتوکندری استفاده از MitoTracker است که یک رنگ قابل نفوذ سلولی است که حاوی یک بخش فعال کلرومتیل تیوله ملایم است. به همین دلیل، می‌تواند با گروه‌های لیو الکل آزاد باقی‌مانده‌های سیستئین واکنش نشان دهد تا به پیوند کووالانسی با پروتئین ماتریکس دست یابد. برخلاف لکه های معمولی خاص میتوکندری مانند رودامین 123 (Rh123) یا تترمتیل روزامین، MitoTracker پس از از بین رفتن پتانسیل غشا با فیکساتور شسته نمی شود.

با توجه به لکه های میتوکندری، برخی از رنگ ها می توانند بخش های اسیدی مانند لیزوزوم ها را علامت گذاری کنند. این نوع رنگ LysoTracker نام دارد. آنها از گروه های پایه ضعیف متصل به یک گروه فلورسنت تشکیل شده اند و به غشاء نفوذ می کنند. این امکان وجود دارد که پروتوناسیون این ژن های پایه دارای میل ترکیبی با بخش های اسیدی باشد. LysoTracker رنگ های مختلفی برای انتخاب دارد. محفظه ای شبیه به لیزوزوم، واکوئل موجود در ساکارومایسس سرویزیه و سایر قارچ ها است و این فضای محدود غشایی نیز یک محیط اسیدی است. اگر می خواهید محفظه های فوق را زیر میکروسکوپ فلورسانس مشاهده کنید، از FM 4-64 یا FM 5-95 و غیره استفاده کنید.

علاوه بر استفاده از رنگ‌های فلورسنت غیرپروتئینی خاص برای برچسب‌گذاری محفظه‌های سلولی، می‌توان ناحیه مورد نظر را با پروتئین‌هایی که برای مکان‌های مختلف سلول ترجیح دارند رنگ‌آمیزی کرد. این پروتئین ها را می توان به رنگ های فلورسنت متصل کرد و از طریق میکروسکوپ فلورسانس قابل مشاهده است.

نمونه ای از استفاده از این روش این است: آگلوتینین جوانه گندم (WGA) می تواند به طور خاص به گروه های اسید سیالیک و N-acetylglucosamine در غشای پلاسمایی سلول متصل شود و WGA را به یک سلول متصل کند. رنگ فلورسنت ، به طوری که ما می توانیم غشای سیتوپلاسم را مشاهده کنیم.